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完成單位:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 藥品 巴爾吡爾和進(jìn)口原液兩種藥液,均為水溶液,由北京娜爾生物技術(shù)有限公司提供。
1.1.2 菌種 馬腺疫鏈球菌C55100、金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2和魏氏梭菌均購自中國獸藥監(jiān)察所。無乳鏈球菌06413、大腸桿菌3#和停乳鏈球菌29系從蘭州、江蘇和大理采集的患臨床型乳房炎的病乳中分離、鑒定并凍干保存的菌種。
1.1.3 培養(yǎng)基 普通牛肉湯、7%羊血瓊脂斜面、水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基 (MH)。
1.1.4 不銹鋼管 外徑8mm,內(nèi)徑6mm,高10mm。
1.2 方法
1.2.1 杯碟法抑菌試驗(yàn) 將凍干菌種開啟后,分別接種到普通牛肉湯中,37℃溫箱中培養(yǎng)20h,經(jīng)涂片鏡鑒純粹后,分別接種于血瓊脂斜面,37℃溫箱中培養(yǎng)20h后取出,置4℃冰箱中保存。試驗(yàn)時(shí)將血斜面菌種分別接種于普通牛肉湯中,37℃溫箱中培養(yǎng)20h,經(jīng)涂片鏡鑒純粹后,將不同菌株的菌液進(jìn)行不同倍數(shù)的稀釋(由與試驗(yàn)確定)。將稀釋好的菌液用滅菌吸管吸取0.1ml,加到MH 平板上,并立即用涂抹棒將菌液均勻涂抹于整個(gè)瓊脂表面。平皿室溫放置5-10min,待菌液吸干后,將小鋼杯在酒精燈上微微燒灼,等距離立置在瓊脂表面上數(shù)個(gè),然后將不同稀釋濃度的藥液分別加入鋼杯中,爾后平皿蓋換成陶瓦蓋,平置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h,取出后用游標(biāo)卡尺測量抑菌圈直徑。每株菌重復(fù)上述試驗(yàn)2-3次,取平均值,即為該藥對此菌株的抑菌結(jié)果。
1.2.2 試管抑菌試驗(yàn) 將巴爾吡爾藥液用肉湯進(jìn)行稀釋,將藥液分別稀釋成1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320和1:640共8個(gè)稀釋度,每個(gè)稀釋度分別裝于8只試管(12mm×100mm)內(nèi),每管2mL,再分別加入培養(yǎng)20h各菌株1000倍肉湯稀釋液0.05mL。另設(shè)一管藥物對照(不加菌液)和各菌株的細(xì)菌對照(2mL肉湯加0.05mL菌液),置于37℃溫箱培養(yǎng)24h后,判定抑菌效果。
1.2.3 殺菌試驗(yàn) 按農(nóng)業(yè)部獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范,采用試管內(nèi)2倍稀釋法進(jìn)行。試驗(yàn)前將24h肉湯培養(yǎng)物離心,棄去上清液,沉淀用0.03M磷酸鹽緩沖液制成一定濃度的細(xì)菌混懸液,并與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較,將菌液調(diào)整到試驗(yàn)所需的活菌數(shù)。將巴爾吡爾藥液用滅菌蒸餾水進(jìn)行對倍稀釋,每管2.5ml,然后加等量細(xì)菌懸液,混勻并計(jì)時(shí),作用10min、20min和30min后,取0.5ml加入1.5ml中和劑(磷酸鹽緩沖液)、中和10min后,取0.5ml加到4.5ml營養(yǎng)肉湯中,37℃培養(yǎng)7d。以無菌生長的最大稀釋倍數(shù)作為本品的最小殺菌濃度(MIC),其作用時(shí)間為最短有效作用時(shí)間。并設(shè)營養(yǎng)肉湯及磷酸鹽緩沖液(代替消毒劑)為對照。
2 結(jié)果
表1 巴爾吡爾和進(jìn)口原液杯碟法抑菌試驗(yàn)結(jié)果 單位:直徑mm
表2 巴爾吡爾殺菌試驗(yàn)結(jié)果
注:+為細(xì)菌生長,-為細(xì)菌不生長
表3 巴爾吡爾和進(jìn)口原液試管法抑菌試驗(yàn)結(jié)果
注:+為細(xì)菌生長,-為細(xì)菌不生長
3 結(jié)論
巴爾吡爾和進(jìn)口原液不稀釋對畜禽常見病原菌均有較好的抑菌效果,但做1:5和1:10稀釋后無抑菌效果或抑菌效果很差。試管對倍稀釋法抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明,巴爾吡爾對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2、大腸桿菌3#、停乳鏈球菌和魏氏梭菌的有效抑菌濃度為1:10,對馬腺疫鏈球菌和無乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1:20。進(jìn)口原液對金黃色葡萄球菌和停乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1:40;對大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2、大腸桿菌3#、和魏氏梭菌的有效抑菌濃度為1:80;對馬腺疫鏈球菌和無乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1:320。
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