應(yīng)對春季水溫變化，提高草魚抗應(yīng)激能力

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應(yīng)對春季水溫變化，提高草魚抗應(yīng)激能力

春季氣溫回暖，水產(chǎn)生產(chǎn)進(jìn)入旺季。同時春季氣溫變化幅度較大，水體冷熱變換迅速，導(dǎo)致草魚應(yīng)激較大，抗病力變差，餌料系數(shù)升高。研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激導(dǎo)致血清中皮質(zhì)醇含量升高，皮質(zhì)醇具有抑制免疫系統(tǒng)發(fā)揮作用的功效。所以降低血清中皮質(zhì)醇含量，可有效抵抗水溫冷熱變換帶來的應(yīng)激。膽汁酸做為一種中草藥提取物、綠色飼料添加劑，額外給草魚飼料中添加膽汁酸可有效降低皮質(zhì)醇的含量，達(dá)到提高草魚抗應(yīng)激能力的效果。

1 材料與方法

1.1 試驗飼料

以魚粉、麥麩、豆粕、菜粕等原料，配制成草魚魚種常規(guī)配合顆粒飼料作為對照組飼料，在對照組飼料原料中分別添加0、300mg/kg乳能（20%膽汁酸，山東sh龍昌動物保健品有限公司提供）配成2種試驗飼料。膽汁酸實際添加水平為0、60mg/kg。飼料組成及營養(yǎng)成分見表1。所有原料粉碎后過80目篩，各原料按配比稱量后混勻，加適量水混合均勻，經(jīng)小型絞肉機(jī)制成直徑為2 mm的顆粒，于常溫條件下風(fēng)干，儲存于-4℃的冰箱中。

1.2試驗用魚

養(yǎng)殖試驗在山東省淡水水產(chǎn)研究所養(yǎng)殖試驗場進(jìn)行，試驗所用的草魚由山東省淡水研究所養(yǎng)殖試驗場提供，初始體質(zhì)量為11.49±0.82g。試驗共分兩個處理，每個處理設(shè)三個重復(fù)。正式試驗前，草魚在條件相同的其他水族箱用普通草魚配合飼料馴養(yǎng)4周，然后，隨機(jī)分組，每組放養(yǎng)30尾，分別放于400L的養(yǎng)殖桶中進(jìn)行試驗。養(yǎng)殖采用流水飼養(yǎng)，每天8:00～9:00，12:00～13:00，16:00～17:00投飼，日投飼量是魚體質(zhì)量的1％～3％，每兩周稱一次魚體質(zhì)量，并調(diào)整投飼量。每天18:00清除桶底的草魚排泄物。養(yǎng)殖試驗持續(xù)10周。養(yǎng)殖水溫為（22±3）℃，pH為7.0±0.4，溶解氧不低于5.0 mg/L。

表1 草魚基礎(chǔ)飼料組成及營養(yǎng)成分

成分	含量/%	營養(yǎng)成分	含量/%
魚粉	4	水分	7.86
豆粕	21	粗蛋白	28.79
菜粕	20	粗脂肪	4.09
棉粕	8
次粉	24
麥麩	18
大豆油	2
磷酸二氫鈣	2
維生素預(yù)混料	0.2
礦物鹽預(yù)混料	0.8

注：預(yù)混料向每千克日糧提供：VA 6000IU, VD 2000IU, VE 50mg, VK 5mg, VB1 15mg, VB2 15mg, VB3 25mg, VB5 30mg, VB6 10mg, VB7 0,2mg,VB11 3mg, VB12 0.03mg, VC 100mg; Zn 80mg, Fe 150mg, Cu 4mg, Mn 20mg, I 0.4mg, Co 0.1mg, Se 0.1mg, Mg 100mg

1.3 生產(chǎn)性能的測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束時，試驗魚饑餓24 h，將魚從養(yǎng)殖桶中撈出稱魚體質(zhì)量。生長指標(biāo)采用下面的公式計算：

增重率/% =（終末魚體質(zhì)量-初始魚體質(zhì)量）/初始魚體質(zhì)量╳100；

飼料系數(shù) =飼料總消耗量/魚體總增重；

1.4 運輸應(yīng)激

生長試驗結(jié)束后，從每個養(yǎng)殖桶中隨機(jī)撈取5尾草魚，迅速放入200mg/L MS-222中，在30s內(nèi)深度麻醉(不影響血清皮質(zhì)醇含量的測定)，分別采集血樣用于基礎(chǔ)皮質(zhì)醇水平測定。運輸應(yīng)激：每組用自制塑料袋網(wǎng)撈取草魚10尾放入盛水15L的塑料袋中，充入純氧，打包，用皮卡車運輸6h，共運輸6包，60尾魚。運輸結(jié)束后統(tǒng)計成活率。

1.5 血清皮質(zhì)醇含量測定

草魚血清中皮質(zhì)醇參照Picketind方法用放射免疫法(RIA)進(jìn)行測定。每組取8尾魚進(jìn)行尾靜脈取血，并將魚血在4000 r/min條件下離心10 min以提取血清，用于皮質(zhì)醇含量的測定。試劑盒采購自南京建成生物技術(shù)有限公司。

1.6數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件中獨立樣本T檢驗對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理，所有的數(shù)據(jù)結(jié)果均以平均值(X(＿＿))±標(biāo)準(zhǔn)偏差(S.D.)表示，顯著水平采用0.05。

2 結(jié)果

各飼料組草魚的生長性能見表2。飼料中添加膽汁酸能顯著提高草魚的增重率（P<0.05），顯著降低草魚的飼料系數(shù)（P<0.05）。飼料中添加60 mg/kg膽汁酸組草魚的增重率顯著高于不添加膽汁酸的對照組（P<0.05），飼料系數(shù)顯著低于不添加膽汁酸的對照組（P<0.05）。

表2 各飼料組草魚的生長性能

膽汁酸添加量/（mg/kg）	初始體重/g	終末體重/g	增重率/%	T-檢驗	飼料系數(shù)	T-檢驗
0	11.56±1.21	48.90±7.73	321.50±22.27	P<0.05	1.66±0.56	P<0.05
60	11.28±1.07	52.60±6.84	365.20±17.39		1.53±0.03

注：同列肩標(biāo)字母不同表示差異顯著（P<0.05）。

各飼料組草魚運輸成活率和血清中皮質(zhì)醇含量見表3。飼料中添加膽汁酸對草魚的運輸成活率沒有影響。飼料中添加60 mg/kg膽汁酸組草魚血清中皮質(zhì)醇含量顯著低于不添加膽汁酸的對照組（P<0.05）。

表3飼料中添加膽汁酸對成活率和血清皮質(zhì)醇含量的影響

膽汁酸添加量/（mg/kg）	運輸成活率/%	運輸前皮質(zhì)醇含量/（ng/ml）	運輸后皮質(zhì)醇含量/（ng/ml）	T-檢驗
0	100	5.59±0.32	54.26±3.56	P<0.05
60	100	5.43±0.45	20.34±1.45

注：同列肩標(biāo)字母不同表示差異顯著（P<0.05）。

3 討論

       早期的研究結(jié)果表明，膽汁酸是一種脂肪代謝促進(jìn)劑（Masatoshi, 1985），能夠促進(jìn)動物的生長（Vilder and Enzo, 2002）。膽汁酸的主要功能是幫助脂肪以及脂溶性物質(zhì)消化吸收和利用。膽汁酸作為一種乳化劑，增加了同脂肪酶的接觸面積（Bowen, 2001;  Mukhopadhyay and Maitra, 2004）。同時膽汁酸可以通過提高脂肪酶的活性來幫助脂肪消化。在本試驗中，飼料中添加60 mg/kg膽汁酸能顯著提高草魚的增重率，顯著降低草魚的飼料系數(shù)，表明膽汁酸提高了草魚的生產(chǎn)性能和飼料利用率。

       應(yīng)激是指有害作用因子引起的動物一系列非特異性的生理防御反應(yīng)的總和。在水產(chǎn)動物養(yǎng)殖中，水溫變化(低溫，高溫)、運輸、驚嚇、水體污染、酸堿度變化．病原微生物侵襲、高密度飼養(yǎng)，分池、捕捉，飼料更換等活動都可能產(chǎn)生應(yīng)激。當(dāng)魚類受到這些應(yīng)激因子的刺激時，副腎皮質(zhì)肥大，體內(nèi)糖皮質(zhì)激素和甾類皮質(zhì)激素等水平上升，由此引起血淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞和溶菌酶的活性急劇下降，動物的免疫系統(tǒng)受到抑制，表現(xiàn)增重減慢，死亡率增加，從而嚴(yán)重影響了養(yǎng)殖的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益。在本實驗中，添加膽汁酸能顯著降低草魚血清中皮質(zhì)醇的濃度，表明膽汁酸能提高草魚的抗運輸應(yīng)激的能力。

4 結(jié)論

       綜上所述，草魚在運輸?shù)葟?qiáng)應(yīng)激刺激因子作用下，皮質(zhì)醇激素含量迅速升高，從而引起對機(jī)體新陳代謝和生理機(jī)能的改變。運輸應(yīng)激的刺激可能導(dǎo)致草魚肝臟等組織的損傷，造成機(jī)體不可逆轉(zhuǎn)的生理變化，從而加速了魚體的死亡，使得草魚的運輸困難。飼料中膽汁酸的添加可以有效提高草魚的抗應(yīng)激能力，降低應(yīng)激對肝臟等組織的損傷。