蝦青素和雙乙酸鈉聯(lián)用對(duì)斷奶仔豬‑生產(chǎn)性能和抗氧化能力的影響

綠色華瑞

蝦青素和雙乙酸鈉聯(lián)用對(duì)斷奶仔豬‑生產(chǎn)性能和抗氧化能力的影響

‑林建坤‑郭瑞萍‑

山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院畜牧系，濰坊‑261041‑

摘‑要‑試驗(yàn)旨在研究飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉的混合制劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能和抗氧化能力的影‑響。試驗(yàn)選取 48 頭 28 日齡的三元雜交斷奶仔豬，隨機(jī)分為 4 個(gè)組，每組 6 個(gè)重復(fù)，分別飼喂含 0 ( 對(duì)照‑組) 、1100 ( 低劑量組) 、2200 ( 中劑量組) 和 4400 ( 高劑量組) mg/kg 的蝦青素和雙乙酸鈉混合物的飼‑糧。結(jié)果表明: 與對(duì)照組相比，中劑量組和高劑量組仔豬平均日增質(zhì)量 ( ADG) 以及空腸黏膜總抗氧化能‑力 ( TAOC) 、過氧化氫酶 ( CAT) 活性顯著升高，而空腸黏膜 MDA 含量顯著降低 ( P ＜0. 05) ; 高劑量組仔‑豬平均日采食量 ( ADFI) 以及血清 ( TAOC) 、超氧化物歧化酶 ( SOD) 、谷胱甘肽過氧化物酶 ( GSH － px) 、‑CAT 活性而 F/G 和血清 MDA 含量顯著降低 ( P ＜0. 05) 。試驗(yàn)表明: 飼糧中添加蝦青素和雙乙酸鈉的混合制‑劑能提高仔豬的養(yǎng)分消化率和抗氧化能力，進(jìn)而提高仔豬的生產(chǎn)性能。

‑關(guān)鍵詞‑蝦青素; 雙乙酸鈉; 斷奶仔豬; 生長(zhǎng)性能; 空腸; 抗氧化能力‑

中圖分類號(hào): S 816. 7‑文獻(xiàn)標(biāo)志碼: A‑文章編號(hào): 1002 －2813 (2014) 13 －0028 －05‑

蝦青素為一種廣泛存在于多種生物中的類胡蘿‑卜素，其結(jié)構(gòu)中多個(gè)共軛雙鍵和羥基基團(tuán)，具有很‑強(qiáng)的還原性，因而蝦青素具有優(yōu)秀的抗氧化能力。‑畜牧業(yè)中蝦青素的應(yīng)用多集中在水產(chǎn)動(dòng)物以及家禽‑的著色效果上，在抗氧化性能上的研究尚停留在體‑外細(xì)胞培養(yǎng)和小鼠試驗(yàn)上。此外，畜牧生產(chǎn)上飼糧‑的霉變情況十分普遍，而霉菌毒素能夠加重氧化應(yīng)‑激對(duì)斷奶仔豬的損傷，尤其表現(xiàn)在腸道方面的損‑傷。雙乙酸鈉是畜牧上常用的防腐防霉劑，其防霉‑防腐效果好，在動(dòng)物體內(nèi)能完全代謝且代謝產(chǎn)物主‑要為二氧化碳和水，不會(huì)對(duì)動(dòng)物以及畜產(chǎn)品安全造‑成威脅，因而在食品以及飼料行業(yè)應(yīng)用普遍。然而‑目前對(duì)于蝦青素和雙乙酸鈉在斷奶仔豬飼糧中的應(yīng)‑用研究還較少，且這 2 種物質(zhì)在斷奶仔豬飼糧中聯(lián)‑合應(yīng)用的抗氧化和促生長(zhǎng)效果還有待動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證。‑試驗(yàn)旨在研究斷奶仔豬飼料中蝦青素與雙乙酸‑鈉聯(lián)用對(duì)仔豬腸道氧化還原平衡狀態(tài)以及生長(zhǎng)性能‑發(fā)揮的影響，為這 2 種添加劑在畜牧業(yè)中的聯(lián)合應(yīng)‑用提供理論依據(jù)，為研究新型混合飼料添加劑提供‑參考數(shù)據(jù)。

‑1‑材料與方法

‑1.1‑試劑材料‑蝦青素 (純度為 58. 6%) 為自行提取，雙乙‑酸鈉 (純度 ＞ 99%) 購自沈陽市圓融化工有限公‑司。以分析純氯化鈉配制滅菌生理鹽水 (0. 9%‑NaCl)，高溫高壓滅菌后備用。‑

1.2‑試驗(yàn)動(dòng)物與分組‑試驗(yàn)選取48 頭28 日齡的初始體質(zhì)量為 (7.09 ±‑0. 69) kg 的三元雜交斷奶仔豬，隨機(jī)分配到 4 個(gè)處‑理組，每組 6 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù) 2 頭豬。對(duì)照組飼‑喂基礎(chǔ)飼糧，其余 3 個(gè)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添‑加了 1 100 (低劑量組)、2 200 (中劑量組) 和‑4 400 (高劑量組) mg/kg 的蝦青素和雙乙酸鈉混‑合物 (w∶w =1∶10) 的試驗(yàn)飼糧。試驗(yàn)期 28 d。

‑1.3‑飼糧配方及飼養(yǎng)管理‑飼糧為玉米 － 豆粕型粉料，基礎(chǔ)飼糧配方及營(yíng)‑養(yǎng)水平參考 NＲC (2012) 5 － 10 kg 以及 10 － 20 kg‑體質(zhì)量階段的豬營(yíng)養(yǎng)需要配制?；A(chǔ)飼糧組成及營(yíng)‑養(yǎng)水平見表 1。以圈為重復(fù)單位，每圈 4 頭仔豬。‑每日飼喂 4 次 (分別為上午 8: 00、上午 12: 00、‑下午 16: 00 和晚上 20: 00)，飼喂量為每次采食結(jié)‑束后料槽中略有剩余為度，自由飲水，其余日常管‑理均按常規(guī)進(jìn)行。

‑表 1‑基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平 (飼喂基礎(chǔ))‑

注: 維生素預(yù)混料為每千克飼糧提供: 維生素 A 8 500、維生素 D3‑2 000、維生素 K31. 3、維生素 B11. 5 、維生素 B25. 5、維生素 B120. 03、‑煙酸 16、葉酸 0. 7、D － 泛酸 16 和生物素 0. 2 mg。微量元素預(yù)混料為每‑千克飼糧提供: Fe 115、Cu 150、Zn 115、Mn 55、Se 0. 3 和 I 0. 4 mg。‑

1.4‑樣品采集‑

1.4.1‑飼料樣品采集‑試驗(yàn)飼糧配制當(dāng)天、試驗(yàn)第 14 和 28 d 對(duì)各處‑理飼糧進(jìn)行采樣，3 次采樣混合均勻后以四分法進(jìn)‑行縮份之后 －20 ℃保存待測(cè)。

‑1.4.2‑血清樣品采集‑試驗(yàn)第 0 和 28 d 上午 8: 00 對(duì)所有豬只進(jìn)行前‑腔靜脈采血 10 mL，緩慢引入真空玻璃離心管，室‑溫靜置 10 min 后 3 500 r/min 下離心 10 min，取上‑清液以 EP 管分裝后保存在 －20 ℃冰箱中待測(cè)。

‑1.4.3‑糞樣采集‑在試驗(yàn)第 20 － 26 天以鹽酸不溶灰分為內(nèi)源指‑示劑進(jìn)行部分收糞，以圈為單位對(duì) 7 d 的糞便樣品‑進(jìn)行混合取樣 60 g 左右，所有糞樣按照每 100 g 糞‑樣加入 5 mL 硫酸的比例加入硫酸，再滴幾滴甲苯‑后充分混合均勻，在 65 ℃ 烘箱中烘干至恒重，粉‑碎后保存待測(cè)。

‑1.4.4‑空腸黏膜樣品采集‑試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天，在各處理組中選取體質(zhì)量接近‑平均體質(zhì)量的豬各 6 頭進(jìn)行屠宰采樣，迅速剖開腹‑腔，分離腸道，截取空腸中段 10 cm 長(zhǎng)度，縱向剖‑開后預(yù)冷生理鹽水沖洗內(nèi)容物，以干凈的載玻片固‑定方向輕輕刮取黏膜，裝入滅菌 EP 管后錫箔紙包‑裹，液氮速凍， －80 ℃保存待測(cè)。

‑1.5‑指標(biāo)測(cè)定

‑1.5.1‑生長(zhǎng)性能指標(biāo)‑平均日采食量 (ADFI): 以圈為單位每日記錄‑豬只的采食量，ADFI = 每圈總采食量/每圈仔豬頭‑數(shù)/試驗(yàn)天數(shù);‑平均日增質(zhì)量 (ADG): ADG = 每圈總增質(zhì)量/‑每圈仔豬頭數(shù)/試驗(yàn)天數(shù);‑料重比 (F/G): 以 ADFI 與 ADG 的比值表示。

‑1.5.2‑腹瀉率和養(yǎng)分消化率‑以圈為單位每日記錄腹瀉情況，按照下列公式‑計(jì)算各處理仔豬腹瀉率:‑腹瀉率/% = 試驗(yàn)期腹瀉仔豬頭次/ (試驗(yàn)仔豬‑頭數(shù) × 試驗(yàn)天數(shù)) ×100‑測(cè)定飼料和糞樣中干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、能量、‑鈣、總磷以及鹽酸不溶灰分的含量，按照下列公式‑計(jì)算養(yǎng)分消化率:‑某養(yǎng)分消化率 (%)‑= 100 － (飼料中指示劑‑含量/糞中指示劑含量 × 糞中某養(yǎng)分含量/飼料中某‑養(yǎng)分含量) ×100‑

1.5.3‑血清指標(biāo)‑血 清 中 總 抗 氧 化 能 力 ( TAOC)，丙 二 醛‑(MDA) 含量以及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘‑肽過氧化物酶 (GSH － px) 和過氧化氫酶 (CAT)‑活性均以分光光度比色發(fā)進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定試劑盒購‑自南京建成生物工程研究所 (南京); 二胺氧化酶‑活性以 ELISA 試劑盒 (GBD 公司，美國) 進(jìn)行測(cè)‑定。以上所有指標(biāo)的測(cè)定步驟參見試劑盒說明書。

‑1.5.4‑空腸黏膜指標(biāo)‑制備空腸黏膜勻漿上清液，取出樣品在冰面上‑解凍后按照試劑盒說明書步驟制備 10% 的空腸黏膜‑勻漿，4 ℃ 2 000 r/min 離心 10 min 取上清液分裝‑待測(cè)。測(cè)定指標(biāo)包括: 組織總蛋白含量，T － AOC，‑MDA 含量，SOD、GSH － Px、CAT 活性。以上指標(biāo)‑采用南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

‑1.6‑數(shù)據(jù)處理與分析‑以 SPSS 17. 0 中的卡方檢驗(yàn)對(duì)腹瀉率進(jìn)行分析，‑以 ANOVA 程序?qū)ζ溆嘀笜?biāo)進(jìn)行方差分析，并以‑Duncan 氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值 ± 標(biāo)準(zhǔn)差‑

‑表示，以 P ＜0. 05 為差異顯著標(biāo)準(zhǔn)。

‑2‑結(jié)果與分析‑2.1‑蝦青素聯(lián)合雙乙酸鈉對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的‑影響

‑從表 2 可見: 飼糧添加 2200 或 4400 mg/kg 蝦‑青素和雙乙酸鈉混合制劑顯著提高斷奶仔豬的末質(zhì)‑量、試驗(yàn)期增質(zhì)量和 ADG (P ＜ 0. 05)。同時(shí)，高‑劑量 (4400 mg/kg) 蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑還‑顯著提高斷奶仔豬 ADFI (P ＜0. 05)，顯著降低 F/‑G (P ＜0. 05)。

‑2.2‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔豬血清‑氧化還原狀態(tài)的影響‑從表3 可見: 與對(duì)照組相比，高劑量組血清TAOC、‑SOD、GSH － Px 和 CAT 活性顯著增加 (P ＜ 0.05)，‑MDA 含量顯著降低 (P ＜0.05)。中、低劑量組上述指‑標(biāo)也具有相同趨勢(shì)，但差異不顯著 (P ＞0.05)。

‑2.3‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔豬腹瀉‑率和養(yǎng)分消化率的影響‑從表 4 可見: 與對(duì)照組相比，中劑量組和高劑‑量組斷奶仔豬腹瀉率顯著降低 (P ＜0. 05)。從表 5‑可見: 添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔豬‑干物質(zhì)、鈣、總磷的全腸道表觀消化率沒有顯著影‑響 (P ＞0. 05)，而顯著提高了粗脂肪和粗蛋白質(zhì)的‑表觀消化率 (P ＜0. 05)。

‑2.4‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔豬血清‑二胺氧化酶含量的影響‑從表 6 可見: 與對(duì)照組相比，添加不同劑量的‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑均能一定程度降低斷奶‑仔豬血清中的二胺氧化酶 (DAO) 含量，且高劑量‑組達(dá)到顯著水平 (P ＜0. 05)。

注同表 2。‑

2.5 蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔豬空腸黏‑膜氧化還原狀態(tài)的影響‑從表 7 可見: 飼糧添加 2200 或 4400 mg/kg 蝦‑青素和雙乙酸鈉混合制劑顯著提高空腸黏膜TAOC‑以 及CAT活性，顯著降低空腸黏膜MDA含量(P ＜0. 05)。

而與對(duì)照組相比，高劑量組空腸黏膜 SOD‑和 GSH － Px 活性顯著升高 (P ＜0. 05)

‑3‑討論‑3.1‑飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶

‑仔豬生長(zhǎng)性能的影響‑

通常仔豬在斷奶階段容易受到諸多不良因素的‑影響導(dǎo)致生長(zhǎng)性能下降，其中多數(shù)與氧化應(yīng)激有‑關(guān)。Naguib 等 (2000) 研究發(fā)現(xiàn)，蝦青素在體外表‑現(xiàn)出強(qiáng)大的清除自由基能力。曹秀明等 (2011) 的‑試驗(yàn)表明，蝦青素具有保護(hù)細(xì)胞膜免受 ＲOS 的損‑傷，且保護(hù)機(jī)制與其抗氧化功能有關(guān)。幼齡動(dòng)物對(duì)‑霉變飼料敏感，極易發(fā)生腹瀉等病理反應(yīng)，引起或‑加重氧化應(yīng)激。雙乙酸鈉是食品和畜牧行業(yè)中常用‑的防霉劑，有研究表明，肉鴨飼糧中添加 0. 2% ～‑0. 4%的雙乙酸鈉能顯著提高肉鴨增質(zhì)量，極顯著‑改善飼料轉(zhuǎn)化率，且對(duì)成活率等無明顯影響。試驗(yàn)‑在仔豬飼糧中添加不同劑量的蝦青素和雙乙酸鈉的‑混合制劑 (w∶w = 1∶10)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)添加劑量達(dá)到 2‑200 ～4 400 mg/kg 時(shí)，仔豬的生長(zhǎng)性能顯著改善。‑這可能是由于蝦青素具有抗氧化能力，而雙乙酸鈉‑防止飼料霉變，減輕飼料霉變導(dǎo)致的仔豬氧化應(yīng)激‑程度加深。兩者共同作用，從飼料和動(dòng)物體兩方面‑共同促進(jìn)仔豬的健康，提高仔豬生長(zhǎng)性能。

‑3.2 飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔

‑豬血清氧化還原狀態(tài)的影響‑

血清中氧化還原狀態(tài)的變化可以反映機(jī)體循環(huán)‑中的氧化還原狀態(tài)。試驗(yàn)飼糧添加蝦青素和雙乙酸‑鈉混合制劑能夠有效提高血清中 TAOC，提高血清‑SOD、GSH － Px、CAT 等抗氧化酶的活性，降低脂‑質(zhì)過氧化產(chǎn)物 MDA 的含量。該結(jié)果表明蝦青素能‑夠進(jìn)入機(jī)體，并且在機(jī)體內(nèi)起到維持氧化還原平衡‑狀態(tài)的作用。

‑3.3 飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶仔‑豬腹瀉率和養(yǎng)分表觀消化率的影響‑斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的發(fā)揮很大程度上與腸道的健‑康有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加 2 200 ～4 400 mg/kg‑蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑時(shí)，仔豬的腹瀉率明顯‑降低，同時(shí)仔豬對(duì)飼糧中粗脂肪和粗蛋白質(zhì)的表觀‑消化率在劑量達(dá)到 4 400 mg/kg 時(shí)表現(xiàn)為顯著的升‑高。可見蝦青素和雙乙酸鈉二者合用能夠明顯促進(jìn)‑斷奶仔豬腸道健康，提高腸道的養(yǎng)分消化能力。

‑3.4‑飼糧添加蝦青素和雙乙酸鈉混合制劑對(duì)斷奶‑仔豬血清二胺氧化酶含量以及空腸氧化還原‑狀態(tài)指標(biāo)的影響‑二胺氧化酶 (DAO) 是主要存在于腸道的細(xì)胞‑內(nèi)酶，當(dāng)腸道受損時(shí)該酶大量外流進(jìn)入血液循環(huán)，‑因此血液中該酶的含量能夠反映腸道受損程度。研‑究表明，蝦青素聯(lián)合雙乙酸鈉能夠明顯減輕空腸細(xì)‑胞受損程度，減少血清 DAO 含量。進(jìn)一步研究確‑定，蝦青素聯(lián)合雙乙酸鈉能夠顯著提高空腸抗氧化‑能力，維持空腸健康狀態(tài)。這可能是由于蝦青素具‑有優(yōu)良的抗氧化性能，而雙乙酸鈉能夠減輕飼料霉‑變程度，減少腐敗物質(zhì)對(duì)腸道的刺激，協(xié)助減輕腸‑道氧化應(yīng)激損傷。

‑4‑結(jié)論‑研究表明，飼糧添加 1 100 ～4 400 mg/kg 蝦青素‑和雙乙酸鈉的混合制劑 (w∶w =1∶10) 有利于維持血清‑和空腸的氧化還原狀態(tài)，促進(jìn)空腸細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，提‑高腸道對(duì)養(yǎng)分的消化能力，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。

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‑選擇發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳發(fā)酵時(shí)間為 3 d。

‑2.7‑驗(yàn)證試驗(yàn)‑由前面的優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果，可知最佳培養(yǎng)條件:‑葡萄糖 5%，蛋白胨 2%，34 ℃，pH7. 5，接種量為‑5%以及培養(yǎng)時(shí)間 3 d，在此條件下發(fā)酵產(chǎn)生的蛋氨‑酸含量相對(duì)最高，重復(fù)試驗(yàn) 3 次，見表 1。

在此發(fā)酵條件下，3 次重復(fù)試驗(yàn)得到的結(jié)果差‑距不大，在 3. 5% 左右，生產(chǎn)蛋氨酸重復(fù)性較好，‑蛋氨酸產(chǎn)量最高達(dá)到 2. 105 g/L，說明該試驗(yàn)條件‑穩(wěn)定，結(jié)果可靠。

‑3‑結(jié)論與展望‑

從茶樹根的內(nèi)生菌中篩選出蛋氨酸產(chǎn)生菌，通‑過薄層分析鑒定，該菌種能產(chǎn)生蛋氨酸。經(jīng)培養(yǎng)基‑成分優(yōu)化和培養(yǎng)條件優(yōu)化，得到最佳培養(yǎng)基成分及‑培養(yǎng)條件: 葡萄糖 5%，蛋白胨 2%，34 ℃，pH‑7. 5，接種量為 5%，培養(yǎng)時(shí)間 3 d，在此條件下發(fā)‑酵產(chǎn)生的蛋氨酸含量最高，平均達(dá)到 2. 065 g/L，‑比優(yōu)化前的 1. 223 g/L 提高 68. 8%，初步達(dá)到了優(yōu)‑化的目的。接下來的工作是對(duì)其做進(jìn)一步的正交優(yōu)‑化試驗(yàn)及對(duì)菌種進(jìn)行基因改造等，以期獲得更高產(chǎn)‑的菌珠。‑

目前，我國己經(jīng)基本掌握了蛋氨酸化學(xué)合成法、‑酶法和微生物發(fā)酵法等生產(chǎn)技術(shù)，在基因工程和生物‑工程領(lǐng)域的研究也取得了一定進(jìn)展。在國際上對(duì)蛋氨‑酸需求旺盛的背景下，我國的蛋氨酸產(chǎn)業(yè)只有在研發(fā)‑和生產(chǎn)工藝上加大創(chuàng)新力度、降低生產(chǎn)成本，才能在‑未來的國際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中處于有利地位。

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