預(yù)混料中氯化膽堿測定:分光光度法

007畜牧

預(yù)混料中氯化膽堿的測定
分光光度法GB/T 17481－1998
1 范圍
本標準規(guī)定了雷氏鹽比色法測定復(fù)合預(yù)混料中氯化膽堿的方法。
本標準適用于復(fù)合預(yù)混料中氯化膽堿的測定。
2 引用標準
下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準最新版本的可能性。
GB/T 6682－1992分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
3 方法原理
用甲醇－三氯甲烷混合溶劑提取試樣中的氯化膽堿，將溶劑蒸干后用水溶解殘渣，再在低溫下加入雷氏鹽生成氯化膽堿雷氏鹽的結(jié)晶，過濾出結(jié)晶，用丙酮溶解，定容。將其丙酮溶液在波長525nm下進行分光光度測定。
4 試劑
本標準所用試劑，除特殊說明外，均為分析純。
實驗室用水符合GB/T 6682中三級水的規(guī)格。
4.1 甲醇。
4.2 丙酮。
4.3 甲醇－三氯甲烷混合液（10+1）。
4.4 量取900mL甲醇和90mL三氯甲烷，混勻。
4.5 雷氏鹽（二氨基四硫代氰酸鉻銨）甲醇溶液｛［NH4Cr（NH3）2（SCN）4］為40g/L｝
4.6 稱取4g雷氏鹽溶于甲醇，加甲醇稀釋至100mL，混勻，置冰箱內(nèi)保存。
4.7 氯化膽堿標準溶液。
4.8 氯化膽堿標準儲備溶液：精確稱取氯化膽堿,10.0000g溶解于水，定量轉(zhuǎn)入100mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻。此液1.00ｍL含0.10g氯化膽堿。
4.9 氯化膽堿標準工作溶液：臨用時精確吸取氯化膽堿標準儲備液（4.5.1）1.00mL于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻。此液1.00mL含氯化膽堿1.0mg。
5 儀器、設(shè)備
5.1 實驗室常用儀器。
5.2 電動振蕩器。
5.3 恒溫水浴槽。
5.4 真空泵。
5.5 離心機：轉(zhuǎn)速能達到3000r/min 。
5.6 分光光度計：有1.0cm比色皿，可在525nm下測定吸光度。
5.7 具塞錐形瓶：200mL。
5.8 高形燒杯：100mL。
5.9 抽濾瓶：250mL。
5.10 坩堝式過濾器：孔徑4μm～7μm 。
6 試樣制備
取具有代表性樣品至少2kg，用四分法縮分至250g，粉碎至過0.42孔篩，混均，裝入樣品瓶內(nèi)密閉，保存?zhèn)溆谩?br /> 7 測定步驟
7.1 提取
精確稱取試樣約5g（含氯化膽堿約0.04 g～0.4g）于具塞錐形瓶中，精確移入甲醇－三氯甲烷混合液（4.3）100.00mL，加塞，在振蕩器上振蕩30min后，用慢速濾紙過濾，得試樣提取液。
7.2 氯化膽堿雷氏的生成和溶出
精確吸取上述提取液（7.1）5.00mL～10.00mL于100mL高形燒杯中，在50℃水浴上蒸發(fā)至干，加水40mL使殘渣溶解，再在冰浴中冷卻到5℃以下，加3mL雷氏鹽溶液（4.4），間斷攪拌反應(yīng)30min，得到氯化膽堿雷氏鹽的結(jié)晶。
將生成的結(jié)晶轉(zhuǎn)入坩堝式過濾器中真空抽濾，燒杯用水洗凈，洗液一并抽濾。濾畢，結(jié)晶用3×5mL水洗，再用5×1mL甲醇洗，抽干，向過濾器中加入丙酮，使結(jié)晶溶解，轉(zhuǎn)入50mL 容量瓶中，用丙酮洗凈過濾器，洗液一并轉(zhuǎn)入50mL容量瓶中，加丙酮至刻度，混勻，得試樣溶液。
7.3 測定步驟
7.3.1 試樣的測定
吸取5.0mL所得試樣液（7.2）于10mL離心管中，離心5min，轉(zhuǎn)速為3000r/min，取上層清液，以丙酮作參比，用1.0cm比色皿在525nm波長下，用分光光度計測定吸光度，在工作曲線上查得試樣中氯化膽堿的含量。
7.3.2 工作曲線的繪制
精確吸取氯化膽堿標準工作液（4.5.2）5.00、10.00、15.00、20.00mL分別置于100mL高形燒杯中，加水40mL，以下按7.2中“再在冰浴中冷卻到5℃以下”以后的操作及7.3.1試樣的測定進行，測各標準工作液的吸光度，繪制工作曲線。
8 測定結(jié)果的計算及表示
8.1 測定結(jié)果按式（1）計算：
X＝m1V/mV1 ………………………………………………(1)
式中：
X ———每千克試樣中氯化膽堿的含量，g ；
m1 ———標準曲線上查得測定時所取試樣液中氯化膽堿的含量，mg ；
V ———試樣提取液的總體積，mL；
m ———試樣質(zhì)量，g ；
V1———試樣測定時吸取試樣提取液的體積，mL。
所得結(jié)果表示到小數(shù)點后一位。




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