小肽的檢測技術

秋水伊人 · 發(fā)表于 2008-1-28 15:25:33

恩能生物科技集團技術服務資料-小肽檢測方法
<檢測原理及方法>
一、原理：利用三氯醋酸作蛋白質沉淀劑，將酶解蛋白粉中的蛋白質和肽鏈較長的肽沉淀，并將其中的短鏈小肽用酸溶解出來，經離心、過濾、消化、蒸餾，測定其蛋白質含量。本方法是參照中華人民共和國輕工行業(yè)標準大豆肽粉標準(QB/ T 2653 -2004)基礎上修訂而來。
二、試劑及儀器：
1）100ml燒杯；
2）10ml、25ml移液管；
3）干過濾裝置；
4）半微量粗蛋白質測定試劑和裝置；
5）15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）；
6）4000 轉/ 分鐘的離心機。
三、方法：準確稱取樣品3克于100 ml燒杯中,加入15 %TCA (三氯乙酸) 溶液25 毫升,混合均勻,靜置5 分鐘。將溶液定量轉移,在4000 轉/ 分鐘下離心10 分鐘后,取全部上清液，用干的濾紙過濾，準確移取其濾液10ml于消化管中，按測定粗蛋質方法消化、定容（100 ml）、移取1 0ml消化液蒸餾，測定其粗蛋白質含量（半微量定氮法）。同時做空白試驗。
四、結果：
小肽%（占干基）=｛（V-V0）×C（HCl）×6．25×0．014×2．5（25ml÷10ml）×10（100 ml÷10ml）｝÷m×100%
式中： V---樣品消耗HCl的體積，ml；
V0---空白消耗HCl的體積，ml；
C（HCl）---鹽酸的摩爾濃度，mol/l；
6．25×0．014---蛋白質轉換系數。
m---稱取樣品質量，ｇ。
小肽%（占蛋白質）=小肽%（占干基）÷粗蛋白質%×100

重復性: A）、每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算術平均值為結果； B）、允許絕對偏差為10%；
C）、以小肽占粗蛋白質的百分含量上報結果。