大蒜多糖對(duì)四氯化碳損傷小鼠肝組織SOD、MDA的影響

貔貅

大蒜中有效成分包括揮發(fā)性成分，糖類(lèi)，肽與各種氨基酸類(lèi),多種酶類(lèi),硫甙類(lèi)及甾體甙類(lèi)。 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、營(yíng)養(yǎng)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)的研究證明：大蒜有降血脂、預(yù)防動(dòng)脈硬化、防治冠心病、腦血栓、消炎殺菌、抗腫瘤、提高機(jī)體免疫力、保護(hù)肝臟、降血壓、降血脂和延緩衰老、促進(jìn)礦物質(zhì)吸收、防治便秘、治療肥胖癥等多方面的生理功能，大蒜多糖是大蒜的主要成分之一，屬于菊糖類(lèi)的果聚糖，具有特殊的保健作用，開(kāi)展大蒜多糖的提取、性質(zhì)、利用等方面的研究，對(duì)于發(fā)揚(yáng)我國(guó)的大蒜產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)，有很高的開(kāi)發(fā)應(yīng)用價(jià)值。目前，對(duì)于大蒜多糖的研究報(bào)道并不多見(jiàn)，本文就大蒜多糖對(duì)四氯化碳所致肝損傷小鼠肝組織中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）影響進(jìn)行了探討。　　1.材料與方法
　　1.1 材料
　　動(dòng)物：昆明種小鼠40只，雄性、健康，購(gòu)自蘭州生物制藥廠。
　　藥品、試劑：大蒜多糖，由中國(guó)農(nóng)科院蘭州畜牧與獸藥研究所提??；1﹪CCl4 橄欖油溶液；冰醋酸（分析純）；超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)試盒、丙二醛（MDA）測(cè)定試劑盒、組織蛋白測(cè)定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。
　　儀器：紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)（日本島津），恒溫水浴鍋，臺(tái)式離心機(jī)，微量式移液器
　　1.2方法與步驟
　　小鼠隨機(jī)分為5組，每組8只:正常對(duì)照組（I組）、CCl4 模型組（II組）、多糖低劑量組（III組）、多糖中劑量組（IV組）和多糖高劑量組（V組）。禁食12小時(shí)，稱(chēng)重，按0.1ml/10g 體重灌胃1﹪ CCl4 橄欖油溶液（灌服組為II、III、IV、V組），I組灌服生理鹽水；5小時(shí)后III、IV、V 組灌服大蒜多糖，劑量分別為100mg/kg，200mg/kg, 400mg/kg。連續(xù)灌服7d，處死前10小時(shí)再次灌服1﹪CCl4橄欖油溶液（方法同前）。頸椎脫臼處死小鼠，摘取肝臟進(jìn)行研磨，制成肝組織勻漿(10%)，按試劑盒說(shuō)明書(shū)在550nm 處測(cè)定肝組織中SOD活力，在532nm 處測(cè)定MDA含量，同時(shí)利用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行組織中蛋白質(zhì)的測(cè)定。
　　1.3 統(tǒng)計(jì)方法
　　組織勻漿中SOD活力的計(jì)算:(U/mg prot)SOD 活力=(對(duì)照管AO-測(cè)定管AO)÷對(duì)照管AO÷50%×(反應(yīng)總體積÷取樣量)÷組織中蛋白含量組織勻漿中SOD活力的計(jì)算:(nmol/mg prot)
MDA含量=(測(cè)定管AO-測(cè)定空白管AO)÷(標(biāo)準(zhǔn)管AO-標(biāo)準(zhǔn)空白管AO)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度÷蛋白含量對(duì)SOD活力、MDA含量結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)均采用x ±s表示。
　　2.結(jié)果
　　2.1大蒜多糖對(duì)各實(shí)驗(yàn)組肝組織中SOD活力和MDA含量的影響測(cè)定結(jié)果見(jiàn)　圖1.

注：與模型組比較，*表示p<0.05,**表示p<0.01

　　2.2大蒜多糖對(duì)各實(shí)驗(yàn)組肝組織中MDA含量的影響測(cè)定結(jié)果見(jiàn)　圖2 　　

注：與模型組比較，*表示p<0.05,**表示p<0.01，***表示p<0.001

　　與正常對(duì)照組比較，四氯化碳模型組肝臟組織中SOD活力降低，肝臟組織中MDA含量顯著升高。100mg/kg的實(shí)驗(yàn)組與模型組比較，SOD活力有提高但差異不顯著(P>0.05),MDA含量顯著降低(P<0.05)；200mg/kg的實(shí)驗(yàn)組與模型組比較SOD活力顯著提高(P<0.05),MDA含量差異極顯著(P<0.01)；400mg/kg的實(shí)驗(yàn)組與模型組相比SOD顯著(P<0.01)， MDA變化差異極顯著(P<0.001)。 　　4.討論
　　SOD是體內(nèi)催化歧化反應(yīng)的一種抗氧化保護(hù)酶，此酶廣泛的存在于各種生物中。SOD對(duì)機(jī)體的氧化和抗氧化平衡起著重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（.O2-）保護(hù)細(xì)胞免受損傷。丙二醛（MDA）是機(jī)體通過(guò)酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用的過(guò)程中產(chǎn)生的，其含量反應(yīng)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化及細(xì)胞損傷的程度。我們采用四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷模型,其機(jī)制主要是四氯化碳進(jìn)入機(jī)體后在肝臟經(jīng)細(xì)胞色素P450激活為自由基·CCl3 攻擊肝細(xì)胞膜上的磷脂分子,繼而與膜脂質(zhì)和蛋白質(zhì)大分子進(jìn)行共價(jià)結(jié)合,使蛋白質(zhì)代謝障礙,引起膜結(jié)構(gòu)和功能完整性的破壞。另外,·CCl3 可抑制細(xì)胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性,使Ca2 + 內(nèi)流增加。兩種途徑最終導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化物反應(yīng),細(xì)胞內(nèi)MDA含量增加,SOD活性下降。從圖中可知，CCl4對(duì)肝臟SOD的影響較對(duì)MDA的緩和，在灌服大蒜多糖后，對(duì)兩者的影響作用均呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。在劑量為400mg/kg時(shí)，SOD的活力幾乎恢復(fù)到正常水平，而對(duì)于MDA，它們之間還存在著一定差距。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明低濃度大蒜多糖對(duì)CCl4所致的化學(xué)性肝損傷有一定的緩解作用；中濃度大蒜多糖對(duì)肝損傷的緩解作用相對(duì)較強(qiáng)；高濃度大蒜多糖有良好的緩解作用。這可能是大蒜多糖通過(guò)穩(wěn)定細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化而發(fā)揮作用的結(jié)果。