酶蛋白質(zhì)量濃度測定

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酶蛋白質(zhì)量濃度測定
1．酶蛋白濃度測定的方法  酶濃度嚴(yán)格來說是指酶分子的質(zhì)量濃度，常以酶蛋白濃度來表示。人體體液中的酶有幾百種，除LPS、LCAT、ChE、銅氧化酶（CER ）外，大多數(shù)酶的含量在μg/L水平甚至更低。因此，酶活性濃度的測定是目前主要測定方法。20世紀(jì)70年代以后，隨著新技術(shù)特別是免疫學(xué)技術(shù)的發(fā)展，酶的定量分析技術(shù)中出現(xiàn)了許多利用酶蛋白的抗原性，通過抗原抗體反應(yīng)直接測定酶蛋白質(zhì)量的新方法。
國內(nèi)外曾使用電泳法、柱層析法、免疫化學(xué)法等測定酶濃度，其中以免疫化學(xué)法應(yīng)用較廣。免疫化學(xué)法是利用酶蛋白的抗原性，制備特異性抗體后用免疫學(xué)方法測定酶濃度。用于酶濃度測定的免疫化學(xué)方法有：免疫抑制法、免疫沉淀法、放射免疫測定（RIA）、化學(xué)發(fā)光免疫測定（CLIA）、酶免疫測定（EIA）、熒光酶免疫測定（FEIA）等。其中，前兩種方法可用于酶活性濃度測定，其他方法則用于酶蛋白濃度測定。例如，如免疫抑制法測定CK-MB的活性、免疫沉淀法（單向擴(kuò)散法）法測定超氧化物歧化酶（SOD）的活性；RIA測定胰蛋白酶和彈性蛋白酶濃度、CLIA測定CK-MB的濃度、ELISA測定神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）濃度等。
CK-MB是診斷AMI、測定心肌梗塞面積的重要指標(biāo)。近年來，國外對AMI診斷效率評價時多采用測定CK-MB質(zhì)量，即測定CK-MB的酶蛋白質(zhì)量濃度（Mass）的方法。CK-MB質(zhì)量的測定通常是制備抗CK-M抗體和抗CK-B抗體或采用CK-MB抗體，用CLIA、ELISA、FEIA等方法測定。這些方法適用于臨床自動化分析，具有測定時間短（最快僅需7min）、靈敏性高（最低檢測限<&micro;g/L）和準(zhǔn)確性好的特點(diǎn)，明顯優(yōu)于其他分析測定CK-MB的方法，1990年后逐漸被廣泛接受。為使CK-MB質(zhì)量分析標(biāo)準(zhǔn)化，AACC成立了專門的標(biāo)準(zhǔn)化委員會，最近已研制成功采用重組基因技術(shù)的CK-MB參考材料（Rck-2）。
由于酶濃度測定方法的不同，報告方式也有差異：酶活性濃度單位常以U/L報告，酶質(zhì)量（mass）濃度單位常直接用ng/ml或mg/L報告。臨床醫(yī)生應(yīng)注意報告方式不同所帶來的差異。
2．免疫化學(xué)法測定酶蛋白濃度的優(yōu)缺點(diǎn)  與傳統(tǒng)的酶活性測定法相比，免疫化學(xué)測定法的優(yōu)點(diǎn)主要有：①靈敏度高，靈敏度達(dá)到ng/Ｌ至μg/Ｌ的水平，能測定樣品中用原有其他方法不易測出的少量或痕量酶；②特異性高，幾乎不受體液中其他物質(zhì)，如酶抑制劑、激活劑等的影響，不受藥物的干擾；③能用于一些不表現(xiàn)酶活性的酶蛋白的酶測定，如各種酶原或去輔基酶蛋白，或因遺傳變異而導(dǎo)致合成無活性的酶蛋白，以及失活的酶蛋白等；④在某些情況下，與酶活性測定相結(jié)合，計算免疫比活性，能提供更多的具有臨床應(yīng)用和研究價值新的資料和信息。⑤特別適用于同工酶的測定。
酶的免疫化學(xué)測定也有其局限性。主要表現(xiàn)在：①要制備足夠量的提純酶作為抗原和具有免疫化學(xué)性質(zhì)的抗血清常常是很困難的，而且工作量很大；②測定步驟多，操作繁瑣；③測定成本高。因此，必須熟練掌握免疫化學(xué)技術(shù)，掌握抗原抗體復(fù)合物形成的最佳條件，不斷降低成本，才能既保證測定結(jié)果準(zhǔn)確，又能在臨床廣泛推廣使用。