地錦草對(duì)老齡小鼠不同組織SOD和MDA的影響

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地錦草對(duì)老齡小鼠不同組織SOD和MDA的影響 宮新城，陳福星，宋春麗，周平平，趙麗娟，鐘秀會(huì) 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)中獸醫(yī)學(xué)院， 河北定州 073000

摘要采用給小鼠內(nèi)服地錦草水煎劑的方法，研究了地錦草對(duì)老齡小鼠不同組織超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的影響，發(fā)現(xiàn)血清、肝中SOD的活性明顯高于對(duì)照組（P<0.05），脾、腎、心組織中SOD的活性明顯高于對(duì)照組，差異極顯著（P<0.01）；且地錦草水煎液可以使小鼠肝、心、脾中MDA的含量明顯降低， 差異極顯著（P<0.01）。可見地錦草能夠提高老齡小鼠的血清、心臟、肝臟、脾臟、腎臟的抗氧化能力。 關(guān)鍵詞：地錦草；超氧化物歧化酶；丙二醛 地錦草（Euphorbia humifusa Willd.）系大戟科植物，為常用中藥材，具有清熱解毒、涼血止血、利濕通乳等功效[1，2]，近10年來,人們對(duì)地錦草的化學(xué)組成及其生物學(xué)活性的研究取得了重大進(jìn)展。李寶山等測定了地錦草總黃酮(TFEH)在體外對(duì)自由基的清除率和抑制率，結(jié)果表明,TFEH具有很強(qiáng)的清除和抑制自由基的作用[3]。本文以老齡小鼠為研究對(duì)象，觀察了地錦草對(duì)小鼠不同器官的抗氧化作用。 1 材料與方法 1.1 試驗(yàn)材料 1.1.1供試中草藥地錦草 購自河北省定州市中藥大藥房，經(jīng)鑒定為真品后備用。 1.1.2供試動(dòng)物 昆明系小鼠20只，30周齡，雌雄各半，購自河北醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心，常規(guī)飼養(yǎng)3天，觀察無異常備用。 1.1.3主要試劑 超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒、丙二醛（MDA）測定試劑盒（附標(biāo)準(zhǔn)蛋白）均購自南京建成生物工程研究所。 1.1.4主要儀器 UV-9100型紫外分光光度計(jì) 購自北京瑞利分析儀器公司 1.2試驗(yàn)方法 1.2.1分組及處理 將20只小鼠隨機(jī)分成兩組，即對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組10只.試驗(yàn)組每天灌服0.5毫升地錦草水煎液，對(duì)照組每天灌服等量的生理鹽水，連續(xù)灌服7天. 用眼科鑷摘除眼球收集血液，分離血清；同時(shí)解剖小白鼠，分別取其肝臟、脾臟、心臟和腎臟。 1.2.2組織勻漿的制備 取200mg左右的組織塊在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙?jiān)嚫?，用移液器量?倍于組織塊質(zhì)量的預(yù)冷勻漿介質(zhì)(0.86%的生理鹽水)用移液器取總量的2/3于燒杯中，用眼科剪盡快剪碎組織塊. 將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)沖洗殘留在燒杯中的組織碎塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿， 用勻漿管在冰水中勻漿15min，普通離心機(jī)3500rpm離心15min，取上清夜備用。 1.2.3超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的測定 嚴(yán)格按照SOD和MDA試劑盒操作說明進(jìn)行測定。 2結(jié)果 2.1 地錦草水煎液對(duì)小鼠超氧化物歧化酶（SOD）的影響 由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，給老齡小鼠灌服地錦草水煎劑后，小鼠血清、肝中超氧化物歧化酶（SOD）的活性明顯高于對(duì)照組，差異顯著（P<0.05）；而脾、腎、心等組織中超氧化物歧化酶（SOD）的活性變化更明顯，試驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，差異極顯著（P<0.01），詳見表1。 表1地錦草對(duì)小鼠SOD活力的影響 組別 血清 （Ｕ/ml） 肝 （Ｕ/mg） 脾 （Ｕ/mg） 腎 （Ｕ/mg） 心 （Ｕ/mg） 對(duì)照組 32.68±18.67 92.60±16.72 19.47±16.78 24.48±16.52 20.52±7.52 試驗(yàn)組 48.77±12.34* 110.4±13.35* 36.97±11.42** 46.03±10.22** 39.83±13.28** 注：*表示與對(duì)照組比較差異顯著（P<0.05） ** 表示與對(duì)照組比較差異極顯著（P<0.01） Ｕ/ml 表示每毫升血清所含的活力單位 Ｕ/mg表示每毫克蛋白所對(duì)應(yīng)的活力單位 2.2 地錦草水煎液對(duì)小鼠MDA的影響 由試驗(yàn)結(jié)果可以看出，地錦草對(duì)小鼠血清中丙二醛的含量沒有影響，地錦草水煎液試驗(yàn)組和生理鹽水對(duì)照組間比較，差異不顯著（P>0.05）；而對(duì)腎中丙二醛的含量有明顯的作用，可以降低其含量，差異顯著（P<0.05）；地錦草水煎液試驗(yàn)組小鼠肝、心、脾中MDA的含量更是明顯降低，和生理鹽水對(duì)照組間比較，差異極顯著（P<0.01）。詳見表2。 表2 地錦草水煎液對(duì)小鼠各組織丙二醛（MDA）含量的影響 組別 血清 （nmol/ml） 肝 （nmol /mg） 脾 （nmol /mg） 腎 （nmol /mg） 心 （nmol /mg） 對(duì)照組 12.53±3.58 47.42±8.17 50.39±8.33 33.52±2.62 76.06±14.96 試驗(yàn)組 12.11±2.43 32.51±4.34** 36.01±11.91** 28.46±7.43* 47.07±10.71** 注：*表示與生理鹽水對(duì)照組比較，差異顯著（P<0.05） ** 表示與生理鹽水對(duì)照組比較，差異極顯著（P<0.01） nmol/ml表示每毫升血清所含MDA的量 nmol/mg表示每毫克蛋白所對(duì)應(yīng)的MDA的量 3討論 3.1地錦草對(duì)小鼠體內(nèi)SOD活性的影響 SOD是體內(nèi)催化歧化反應(yīng)的一種抗氧化保護(hù)酶，此酶廣泛的存在于各種生物中。SOD對(duì)機(jī)體的氧化和抗氧化平衡起著重要的作用，此酶能清除超氧陰離子自由基（O2-）保護(hù)細(xì)胞免受損傷。而超氧陰離子自由基（O2-）是機(jī)體細(xì)胞在受到刺激作用后產(chǎn)生的含氧的自由基，由于其外層電子不配對(duì)，故其化學(xué)性質(zhì)十分活潑，極易對(duì)生物大分子發(fā)生氧化反應(yīng)，改變或破壞生物大分子結(jié)構(gòu)的完整性而引起多種疾病[4，5]。因而SOD活力的高低與衰老、腫瘤、炎癥、自身免疫病、血液病、心血管病、腎臟病、消化系統(tǒng)病、輻射藥物作用有密切關(guān)系。如能找到理想的抗氧化藥物對(duì)此類病的治療將非常有益。皮文霞等認(rèn)為糖尿病的發(fā)生是由于體內(nèi)氧自由基的積蓄過多，山茱萸環(huán)烯醚萜總苷可以通過提高SOD活性起到治療作用[6]。本試驗(yàn)旨在測定地錦草對(duì)小鼠SOD活力的影響和MDA含量的變化來檢測地錦草的抗氧化能力，為其臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果表明地錦草能顯著提高小鼠血清、心、肝、脾、腎中SOD的活性，和生理鹽水對(duì)照組相比，差異顯著（P<0.05），且脾、腎、心三項(xiàng)和對(duì)照組相比，差異極顯著（P<0.01）。說明地錦草能顯著增強(qiáng)對(duì)超氧陰離子自由基（O2-）的清除能力，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。李寶山等也報(bào)道地錦草在體外實(shí)驗(yàn)中具有很強(qiáng)的清除和抑制自由基的作用，抗氧化的強(qiáng)度：地錦草>藍(lán)盆花>蕊芭>廣棗>多葉棘豆，并且認(rèn)為地錦草等的消腫、止血、傷口愈合等藥理作用可能與其清除自由基的作用有關(guān)[7]。還有報(bào)道認(rèn)為地錦草抗氧化的主要成分是黃酮類，且對(duì)O2-的作用大于·OH-，對(duì)MDA的生成也有一定的作用[3]。曹瑞珍等報(bào)道地錦草還可以通過提高體內(nèi)過氧化氫酶的活性進(jìn)一步將由SOD歧化·O2-產(chǎn)生的H2O2轉(zhuǎn)變?yōu)镠2O和O2，避免毒性更大的·OH-的產(chǎn)生，減輕和阻斷脂質(zhì)過氧化作用的一級(jí)引發(fā)，保護(hù)機(jī)體免受有機(jī)氫過氧化物的侵害，延緩細(xì)胞的衰老，從而防止自由基引發(fā)的疾病[8]。也有人認(rèn)為自由基在DNA的損傷過程中起著非常重要的作用，尤其是OH-引起的DNA氧化損傷更令人關(guān)注[9]，而DNA的氧化損傷是引起衰老、癌癥等疾病的重要原因之一[10，11 ] 而地錦草中的黃酮類、脂肪酸、鞣質(zhì)等可以通過抗氧化作用使DNA免受氧化損傷[12]。 3.7地錦草對(duì)小鼠體內(nèi)MDA的影響 丙二醛（MDA）是機(jī)體通過酶系統(tǒng)和非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基，而氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，并因此生成的脂質(zhì)過氧化物。生物膜是生命系統(tǒng)中最容易發(fā)生脂質(zhì)過氧化的場所，生物膜主要是由磷脂組成的，而多不飽和脂肪酸又是磷脂的主要組分。當(dāng)生物膜的脂質(zhì)發(fā)生過氧化作用后，其流動(dòng)性必然發(fā)生改變，嚴(yán)重時(shí)，其生物活性喪失，如能量轉(zhuǎn)換，物質(zhì)運(yùn)送，信息傳遞，細(xì)胞分裂和融合等都不能正常發(fā)揮[4]。脂質(zhì)過氧化作用的最后產(chǎn)物主要是丙二醛（MDA），因此丙二醛的量常被用作做脂質(zhì)過氧化的量度。并且丙二醛還可以與蛋白質(zhì)分子的氨基發(fā)生作用導(dǎo)致多肽鏈的鏈內(nèi)交聯(lián)和鏈間交聯(lián)，還能與蛋白質(zhì)的巰基反應(yīng)，修飾了的蛋白質(zhì)和酶將失去他們的生物活性，導(dǎo)致代謝異常，甚至死亡[4，5]．同時(shí)也可以引起膜蛋白共價(jià)交聯(lián)與聚合，使膜蛋白處于永久性締合狀態(tài)，嚴(yán)重限制了膜蛋白在膜平面上的運(yùn)動(dòng)性，也可以導(dǎo)致膜功能的異常。因而對(duì)于抗氧化試驗(yàn)測定丙二醛的含量將非常有意義，其含量?？梢苑磻?yīng)機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接的反應(yīng)出細(xì)胞損傷的程度。本試驗(yàn)旨在測定地錦草對(duì)小鼠MDA的影響，以了解地錦草保護(hù)細(xì)胞受損傷的程度．從試驗(yàn)結(jié)果看，地錦草能顯著抑制MDA的產(chǎn)生，尤其是在肝、脾、心的組織中，明顯低于對(duì)照組，差異極顯著（P<0.01）．說明地錦草具有明顯的抗氧化能力，使小鼠的細(xì)胞膜免受損傷，其中一個(gè)主要的原因可能就是SOD活力顯著提高，大大增強(qiáng)了清除和抑制氧自由基的能力，從而使MDA的產(chǎn)生減少?？梢姷劐\草如能應(yīng)用于臨床治療由于過氧化損傷引起的各種疾病，將有很大的應(yīng)用前景。