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標(biāo)題: 對《不同底物對植酸酶酶活檢測的影響》的質(zhì)疑，感興趣者進(jìn)入 [打印本頁]

作者: tgz5637 時(shí)間: 2008-3-10 17:51
標(biāo)題: 對《不同底物對植酸酶酶活檢測的影響》的質(zhì)疑，感興趣者進(jìn)入
對《不同底物對植酸酶酶活檢測的影響》的質(zhì)疑，感興趣者進(jìn)入。

《飼料工業(yè)》2007 之28卷第20期，有昕大洋的一篇文章《不同底物對植酸酶酶活檢測的影響》，文章結(jié)論部分表述“...配成p8810底物溶液的pH為5.4～5.5，而p3168底物溶液的pH為6.4～6.5...”，“...在本實(shí)驗(yàn)中，用p8810作為底物的植酸酶活性顯著高于用p3168組，與兩者之間底物溶液之間pH值得差異有關(guān)...”。文章作者的這個結(jié)論下得也許太早。是對植酸酶酶活的定義概念理解誤差所致。
以國標(biāo)GB/T 18634-2002 植酸酶的定義為例，假定昕大洋的檢測方法同國標(biāo)：樣品在植酸鈉濃度為5mmol/L,溫度37度，pH5.5下，每分鐘釋放1微mol無機(jī)磷，為1個酶活單位。從定義看，強(qiáng)調(diào)的是植酸鈉濃度為5mmol/L和pH5.5，底物溶液最先配置濃度的實(shí)際定容濃度為到7.5mmol/L, 所以最后測定時(shí)，反應(yīng)濃度為7.5*4/6=5mmol/L.與定義一致?！恫煌孜飳χ菜崦该富顧z測的影響》的誤解主要是在配置植酸鈉時(shí)沒有先調(diào)pH5.5,再定容。因?yàn)槿绻贿@么做將導(dǎo)致兩種后果，不是植酸鈉的濃度不夠5mmol/L，就是反應(yīng)pH必然偏離了pH5.5。與定義不符，導(dǎo)致結(jié)果誤差。明白了這一點(diǎn)，不論用p8810還是p3168 ,配成的底物溶液pH,都應(yīng)該是pH=5.5，（賣酶的不能犯這種概念錯誤）；檢測出的結(jié)果可能是一樣或有差異。至于誰大誰小，應(yīng)由發(fā)酵來源決定。按理論概念，酶的檢測應(yīng)該選用最適底物，才有最大反應(yīng)初速度，何為最適底物，通過試驗(yàn)測定米氏常數(shù)km可以確定,不同菌種來源的植酸酶不能一概而論。
若是能完善點(diǎn)，再討論討論來自不同菌種的植酸酶，作用這兩種底物的Vmax, Km 是多少，就更好。
如果哪位有新的高見，歡迎討論。

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[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-3-11 08:43 編輯 ]

作者: tgz5637 時(shí)間: 2008-3-24 13:56
在sigma網(wǎng)站上已說明p3168 可改用替代品p0109。p3168和p0109是植酸12鈉水合物（Phytic acid dodecasodium salt hydrate，C6H6Na12O24P6 · xH2O）。p8810是植酸鈉水合物（Phytic acid sodium salt hydrate ，C6H18O24P6 · xNa+ · yH2O
）。走三家不如坐一家。如果搞不清酶的檢驗(yàn)方法是怎樣確立的，用不著亂換底物，就用p3168或p0109。
買植酸酶時(shí)，記住問清其產(chǎn)品檢測標(biāo)準(zhǔn)。

[ 本帖最后由 tgz5637 于 2008-3-24 14:02 編輯 ]

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