畜牧人

標題: 瘦肉精檢測方法 [打印本頁]
作者: 泛華生物    時間: 2014-7-23 15:33
標題: 瘦肉精檢測方法
GB/T 5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定
　　氣相色譜-質譜法（GC-MS）
　　GC-MS法優(yōu)點是把色譜高效快速的分離效果和質譜高靈敏度的定性分析有機合起來，能在多種殘留物同時存在的情況下對某種特定的殘留物進行定性、定量分析，而且具更高的檢測極限。Fente C. A等用GC-MS法檢測牛毛中CLB的殘留，最低檢測限為5ng/g；PteerBatioens應用氣相色譜－串聯質譜法(GC-MS-MS)對牛、羊、豬組織中的CLB含量進行檢測，最低檢測限為2ng/g；劉琪等用GC-MS法（EI離子源）檢測豬尿中的CLB，檢測限為0.5ng/mL；VanRhijin等用三甲基硅基或2-二甲基硅基嗎啉衍生物檢測尿提取物中的CLB，衍生物用電脈沖方式或化學離子化方式掃描，會產生更高的靈敏度。另外，GC-MS法與HPLC法相比，檢測靈敏度更高，假陽性率更低。因此，我國將GC-MS法定為檢測CLB的確證性方法（NY/T468~2001）。
　　高效液相色譜法（HPLC）
　　HPLC適合測定熱不穩(wěn)定和強極性的β-激動劑及其代謝產物，而且，HPLC可以與柱前提取、純化及柱后熒光衍生化反應和質譜(MS)等系統(tǒng)聯用，容易實現分析過程的自動化。黃士新等(1995)應用紫外檢測器，在λ=243nm，色譜柱：shimpackCLC-ODS150×6.0mn，流速：1mL/min，柱溫：室溫30℃的條件下檢測豬肝臟和豬肉中的CLB殘留，最低檢測限可達2ng/g[4]。國外有人應用HPLC (二極管陣列檢測器)測定動物性食品中CLB殘留，測得最低檢測限為1.26ng/g，回收率達98.9%[5]。目前，我國已將HPLC法作為檢測CLB殘留的半確證性方法，最低檢測限范圍為1～15ng/g，其優(yōu)點是專屬性好、選擇性強、檢測精確度較高，而且假陽性率低；缺點是樣品處理時間長，檢測過程煩瑣、難于操作，需貴重儀器，在實際應用中受到一定的限制。
　　酶聯免疫吸附法（ELISA）
　　利用免疫學抗原抗體特異性結合和酶的高效催化作用，通過化學方法將植物辣根過氧化物酶（HRP）與克倫特羅（CL）結合，形成酶偶聯克倫特羅。將固相載體上已包被的抗體（羊抗兔IgG抗體）與特異性的抗克倫特羅抗體結合，然后加入待測克倫特羅和酶偶聯克倫特羅，它們競爭性與克倫特羅抗體結合，洗滌后加底物，根據有色物的變化計量待測克倫特羅量。若待測克倫特羅多，則被結合的酶偶聯克倫特羅少，有色物量就少。用目測法或比色法測定樣品中的克倫特羅含量，比色的最佳波長為450 nm，參比波長應大于600 nm。
　　膠體金免疫層析法（Colloidalgold immunochromatography）
　　利用競爭法膠體金免疫層析技術，檢測液中的Clen與金標墊上的金標抗體結合形成復合物，若Clen在檢測液中濃度低于靈敏度值，未結合的金標抗體流到T區(qū)時，被固定在膜上的Clen-BSA偶聯物結合，逐漸凝集成一條可見的T線；若Clen濃度高于靈敏度值，金標抗體全部形成復合物，不會再與T線處Clen-BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區(qū)被C區(qū)的二抗捕獲并形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發(fā)生，即試紙有效.
　　檢驗方法
　　1. 在進行測試前先完整閱讀使用說明書，使用前將試劑板和待檢樣本溶液恢復至室溫。
　　2. 撕開鋁塑袋，取出試紙。
　　3. 依據型號進行操作（尿液不得直接浸濕觀察區(qū)）。
　　3.1 將試紙白色一端浸入尿液中（液面不得超過橫線），保持5秒鐘；
　　3.2 用滴管吸取待檢樣品尿液，逐滴緩慢加入3滴樣品于加樣孔中。
　　4. 將試紙平放1分鐘，等待紅色條帶出現。
　　5. 3～8分鐘內讀取結果，10分鐘后判讀無效。
　　6. 10分鐘內可以檢測出結果
　　結果判讀
　　陽性（+）：僅質控區(qū)（C）出現一條紫紅色條帶。在測試區(qū)（T）內無紫紅色條帶出現。
　　陰性（-）：兩條紫紅色條帶出現。一條位于測試區(qū)（T）內，另一條位于質控區(qū)（C）內。
　　無效：質控區(qū)（C）未出現紫紅色條帶，提示測試失敗或試紙已失效。
　　注意：測試區(qū)（T）內的紫紅色條帶可顯現出顏色深淺的現象。但是，在規(guī)定的觀察時間內，不論該色帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應判定為陰性結果。
　　注意事項
　　1.檢測卡請在保質期內一次性使用。
　　2.檢測時避免陽光直射和電風扇直吹。
　　3.盡量不要觸摸檢測卡中央的白色膜面。
　　4.尿樣滴管不可混用，以免交叉污染。
　　5.如果尿樣出現沉淀或渾濁物，請離心后再檢測。
　　液相色譜—質譜/質譜法（HPLC-MS/MS）
　　參見SN/T1924—2007 進出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法。
　　本標準適用于動物源性食品肌肉和內臟中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測。
　　試樣中的藥物殘留采用pH5.2的乙酸銨緩沖液提取，同時加入β-鹽酸葡萄糖醛甙酶-芳基硫酯酶進行酶解后，提取液經C18和SCX雙SPE柱凈化，液相色譜—質譜進行測定，內標法定量。





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