畜牧人

標(biāo)題: 巴爾吡爾對(duì)畜禽常見病原菌體外抑菌效果觀察 [打印本頁(yè)]
作者: 畜牧人專題    時(shí)間: 2014-1-13 15:23
標(biāo)題: 巴爾吡爾對(duì)畜禽常見病原菌體外抑菌效果觀察

　　完成單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所
　　1  材料與方法
　　1.1  材料
　　1.1.1  藥品  巴爾吡爾和進(jìn)口原液兩種藥液，均為水溶液，由北京娜爾生物技術(shù)有限公司提供。
　　1.1.2  菌種  馬腺疫鏈球菌C55100、金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2和魏氏梭菌均購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。無(wú)乳鏈球菌06413、大腸桿菌3#和停乳鏈球菌29系從蘭州、江蘇和大理采集的患臨床型乳房炎的病乳中分離、鑒定并凍干保存的菌種。
　　1.1.3  培養(yǎng)基  普通牛肉湯、7%羊血瓊脂斜面、水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基 (MH)。
　　1.1.4  不銹鋼管  外徑8mm，內(nèi)徑6mm，高10mm。
　　1.2  方法
　　1.2.1  杯碟法抑菌試驗(yàn)  將凍干菌種開啟后，分別接種到普通牛肉湯中，37℃溫箱中培養(yǎng)20h，經(jīng)涂片鏡鑒純粹后，分別接種于血瓊脂斜面，37℃溫箱中培養(yǎng)20h后取出，置4℃冰箱中保存。試驗(yàn)時(shí)將血斜面菌種分別接種于普通牛肉湯中，37℃溫箱中培養(yǎng)20h，經(jīng)涂片鏡鑒純粹后，將不同菌株的菌液進(jìn)行不同倍數(shù)的稀釋（由與試驗(yàn)確定）。將稀釋好的菌液用滅菌吸管吸取0.1ml，加到MH 平板上，并立即用涂抹棒將菌液均勻涂抹于整個(gè)瓊脂表面。平皿室溫放置5-10min，待菌液吸干后，將小鋼杯在酒精燈上微微燒灼，等距離立置在瓊脂表面上數(shù)個(gè)，然后將不同稀釋濃度的藥液分別加入鋼杯中，爾后平皿蓋換成陶瓦蓋，平置于37℃溫箱中培養(yǎng)24h，取出后用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑。每株菌重復(fù)上述試驗(yàn)2-3次，取平均值，即為該藥對(duì)此菌株的抑菌結(jié)果。
　　1.2.2  試管抑菌試驗(yàn)  將巴爾吡爾藥液用肉湯進(jìn)行稀釋，將藥液分別稀釋成1:5、1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320和1:640共8個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度分別裝于8只試管（12mm×100mm）內(nèi)，每管2mL，再分別加入培養(yǎng)20h各菌株1000倍肉湯稀釋液0.05mL。另設(shè)一管藥物對(duì)照（不加菌液）和各菌株的細(xì)菌對(duì)照（2mL肉湯加0.05mL菌液），置于37℃溫箱培養(yǎng)24h后，判定抑菌效果。
　　1.2.3  殺菌試驗(yàn)  按農(nóng)業(yè)部獸用消毒劑技術(shù)規(guī)范，采用試管內(nèi)2倍稀釋法進(jìn)行。試驗(yàn)前將24h肉湯培養(yǎng)物離心，棄去上清液，沉淀用0.03M磷酸鹽緩沖液制成一定濃度的細(xì)菌混懸液，并與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較，將菌液調(diào)整到試驗(yàn)所需的活菌數(shù)。將巴爾吡爾藥液用滅菌蒸餾水進(jìn)行對(duì)倍稀釋,每管2.5ml,然后加等量細(xì)菌懸液,混勻并計(jì)時(shí),作用10min、20min和30min后，取0.5ml加入1.5ml中和劑（磷酸鹽緩沖液）、中和10min后，取0.5ml加到4.5ml營(yíng)養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)7d。以無(wú)菌生長(zhǎng)的最大稀釋倍數(shù)作為本品的最小殺菌濃度（MIC），其作用時(shí)間為最短有效作用時(shí)間。并設(shè)營(yíng)養(yǎng)肉湯及磷酸鹽緩沖液（代替消毒劑）為對(duì)照。

　　2  結(jié)果
　　表1   巴爾吡爾和進(jìn)口原液杯碟法抑菌試驗(yàn)結(jié)果     單位：直徑mm


  
菌  株
  
巴爾吡爾
進(jìn)口原液
原液
1:5
1:10
原液
1:5
1:10
馬腺疫鏈球菌C55100
17.56
0
0
23.57
13.59
11.69
金黃色葡萄球菌ATCC25923
13.74
0
0
16.62
0
0
大腸桿菌C83-1
21.30
0
0
24.36
13.92
0
豬傷寒沙門氏菌C78-2
16.67
0
0
20.68
12.72
11.15
無(wú)乳鏈球菌06413
22.09
0
0
25.46
13.97
11.85
大腸桿菌3#
19.78
0
0
22.87
12.75
0
停乳鏈球菌29
20.38
0
0
26.49
13.89
11.68
魏氏梭菌
18.40
0
0
20.96
11.65
0

　　表2  巴爾吡爾殺菌試驗(yàn)結(jié)果
  
菌  株
  
10min
20min
30min
1:10
1:20
1:40
1:10
1:20
1:40
1:10
1:20
1:40
馬腺疫鏈球菌C55100
+
+
+
+
+
+
+
+
+
金黃色葡萄球菌ATCC25923
+
+
+
+
+
+
+
+
+
大腸桿菌C83-1
+
+
+
+
+
+
+
+
+
豬傷寒沙門氏菌C78-2
+
+
+
+
+
+
+
+
+
無(wú)乳鏈球菌06413
+
+
+
+
+
+
+
+
+

　　注：+為細(xì)菌生長(zhǎng)，-為細(xì)菌不生長(zhǎng)
　　表3  巴爾吡爾和進(jìn)口原液試管法抑菌試驗(yàn)結(jié)果

  
菌  株
  
巴爾吡爾
進(jìn)口原液
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
馬腺疫鏈球菌C55100
-
-
-
+
+
+
+
+
-
-
-
-
-
-
-
+
金黃色葡萄球菌ATCC25923
-
-
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
+
+
+
+
大腸桿菌C83-1
-
-
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
-
+
+
+
豬傷寒沙門氏菌C78-2
-
-
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
-
+
+
+
無(wú)乳鏈球菌06413
-
-
-
+
+
+
+
+
-
-
-
-
-
-
-
+
大腸桿菌3#
-
-
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
-
+
+
+
停乳鏈球菌29
-
-
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
+
+
+
+
魏氏梭菌
-
-
+
+
+
+
+
+
-
-
-
-
-
+
+
+

　　注：+為細(xì)菌生長(zhǎng)，-為細(xì)菌不生長(zhǎng)
　　3  結(jié)論
　　巴爾吡爾和進(jìn)口原液不稀釋對(duì)畜禽常見病原菌均有較好的抑菌效果，但做1：5和1：10稀釋后無(wú)抑菌效果或抑菌效果很差。試管對(duì)倍稀釋法抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，巴爾吡爾對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2、大腸桿菌3#、停乳鏈球菌和魏氏梭菌的有效抑菌濃度為1：10，對(duì)馬腺疫鏈球菌和無(wú)乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1：20。進(jìn)口原液對(duì)金黃色葡萄球菌和停乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1：40；對(duì)大腸桿菌C83-1、豬傷寒沙門氏菌C78-2、大腸桿菌3#、和魏氏梭菌的有效抑菌濃度為1：80；對(duì)馬腺疫鏈球菌和無(wú)乳鏈球菌的有效抑菌濃度為1：320。




作者: 海鹽調(diào)味品    時(shí)間: 2014-1-13 15:48
謝謝分享，看名字以為是管理員……
作者: huig5182005    時(shí)間: 2014-2-9 18:22
感恩分享！



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