畜牧人

標(biāo)題: 霉菌毒素類產(chǎn)品的鑒別思考,歡迎批評(píng) [打印本頁]

作者: dlmang    時(shí)間: 2009-9-1 18:39
標(biāo)題: 霉菌毒素類產(chǎn)品的鑒別思考,歡迎批評(píng)
本帖最后由 dlmang 于 2009-9-3 08:59 編輯

我研究了一段時(shí)間霉菌毒素類產(chǎn)品,有很多朋友是這類產(chǎn)品的中國(guó)總代或技術(shù)總監(jiān),綜合了大家的關(guān)點(diǎn),我作了個(gè)文件,但不知如何發(fā)到網(wǎng)上供大家參考?
最近我的朋友做了一個(gè)效果試驗(yàn),有一個(gè)產(chǎn)品還是有效果的,在江西,如果有想知道的,請(qǐng)告訴我E-mail,我告訴你是什么產(chǎn)品。
明天我研究明白了如何傳資料,我把我的總結(jié)發(fā)上來,大家看一看,并請(qǐng)批評(píng)。[local]1[/local]
作者: lp1972    時(shí)間: 2009-9-1 18:44
希望看到你的資料,一起學(xué)習(xí)哦
作者: dongwei    時(shí)間: 2009-9-1 18:59
這類產(chǎn)品很多很濫,用戶認(rèn)識(shí)也差異比較大,系統(tǒng)鑒別是很有益處的。
作者: dlmang    時(shí)間: 2009-9-1 19:07
先說一個(gè)分解類的產(chǎn)品,酶解當(dāng)然是一個(gè)最好的辦法,但這就像人能瞬移(動(dòng)畫片中一個(gè)人從一個(gè)地方一下就能到想去的另一個(gè)地方,或者說是什么時(shí)空半遂道)一樣,可想但還做不到,當(dāng)然這個(gè)技術(shù)可能比瞬移實(shí)現(xiàn)容易得多。現(xiàn)在的問題是,當(dāng)毒素進(jìn)入體內(nèi)后,一般會(huì)轉(zhuǎn)移到一個(gè)主要器官,比如黃曲霉毒素B1之肝臟,毒素會(huì)在肝臟內(nèi)被體內(nèi)的一些霉分解,比如打開毒素的某些特定基團(tuán)或化學(xué)鍵,如內(nèi)酯環(huán),低速毒性降低,然后再進(jìn)行一系列的反應(yīng),最終代謝成無毒物質(zhì),排出體外。問題1:這個(gè)毒素的分解需要一組酶,也就是說是一個(gè)酶系,只能代謝成低毒的物質(zhì),這是不完全解毒。問題2:毒素轉(zhuǎn)移到特定器官后,分解毒素的酶是如何轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟的?酶是蛋白質(zhì),不可能從消化道直接進(jìn)入血液,然后在肝臟等特定器官去分解毒素。問題3:酶的活性問題:酶只有在特定的PH值、壓力、溫度等條件下才能產(chǎn)生作用,現(xiàn)在的技術(shù)水平生產(chǎn)出來的酶(暫且認(rèn)為能生產(chǎn))是否適合動(dòng)物的消化道哪?舉個(gè)例子,溫度降10度,酶活下降一半,下降20度、30度還能剩下多少哪?問題4:現(xiàn)在的毒素有幾十個(gè)類幾百上千個(gè)種(可能說的不科學(xué)),且每一個(gè)都需要一組酶,這個(gè)問題何年何月可完全解決?。烤退闶乾F(xiàn)在研究成熟的幾個(gè),如AFB1、ZEN、T-2、OTA、煙曲霉、F-2等吧,就有十幾個(gè),可能得需要幾個(gè)酶才能解決……
目前歐洲還不認(rèn)為能生產(chǎn)出這樣的酶能解決毒素問題,不過在咱這好像被說的很神,至于為什么有一定效果,咱們下回分解。
作者: dlmang    時(shí)間: 2009-9-1 20:47
補(bǔ)充一個(gè)問題5:能分解毒素的酶的來源問題,這樣的特種酶的合成是比較困難的,更不可能進(jìn)行商業(yè)化運(yùn)做,唯一的辦法就是找到一種微生物培養(yǎng),使其產(chǎn)酶。這種微生物的從哪里來,或者上哪去找?有人說牛的瘤胃里有這咱微生物,這里就出現(xiàn)了兩個(gè)問題1):牛也會(huì)出現(xiàn)毒素中毒,成年牛的解毒能力也不強(qiáng),好像有資料說最多30%-45%這樣,也就是說這種微生物及其分泌的酶的解毒能力很一般。2):瘤胃內(nèi)的PH值等各種理化環(huán)境和豬與禽等單胃動(dòng)物有很大的區(qū)別,在瘤胃內(nèi)的酶到豬或禽的胃內(nèi)還有多少酶活?也有人說是來自豬的胃(不知道是不是個(gè)笑話),如果豬胃內(nèi)有這種微生物或酶,我想需要讓動(dòng)物中毒,這個(gè)劑量得夠大。說能分解的好像都是歐洲的產(chǎn)品,而且還很貴。
作者: chenhr2    時(shí)間: 2009-9-1 20:56
水太深了!真的很難講!
作者: zmzdq    時(shí)間: 2009-9-1 21:40
希望看到你的資料。
作者: dlmang    時(shí)間: 2009-9-3 09:32
還是沒有研究明白如何上傳,對(duì)不起大家了。我還是一點(diǎn)一點(diǎn)說吧。
作者: dlmang    時(shí)間: 2009-9-3 09:32
成份分類 -- 礦物質(zhì)類
        膨潤(rùn)土類(鈉基、鈣基)(大多數(shù)國(guó)內(nèi)產(chǎn)品和部分國(guó)外產(chǎn)品)
        蒙脫石類(大多數(shù)國(guó)內(nèi)產(chǎn)品和部分國(guó)外產(chǎn)品)
        陶土類
        其他類
思考問題
        對(duì)非極性霉菌毒素是否有吸附性 ?
        對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的非選擇性吸附?
        產(chǎn)生作用的添加量 ?        
思考問題—我的答案
        未經(jīng)處理的膨潤(rùn)土和蒙脫石類礦物質(zhì)在達(dá)到一定添加量時(shí)(5-20kg/T)對(duì)極性霉菌毒素有較強(qiáng)的吸附性,對(duì)非極性霉菌毒素幾乎無吸附性。
        對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有非選擇性吸附,如部分氨基酸和維生素。
        產(chǎn)生作用的添加量較高,理論值為2% ,傳說美國(guó)有個(gè)什么寶就是這類產(chǎn)品。
思考問題—我的答案
        經(jīng)處理(離子置換、分子修飾、電荷修正)的并具有雙極性的礦物質(zhì)對(duì)極性霉菌毒素和非極性霉菌毒素均有較強(qiáng)吸附性。
    (2006年世界霉菌毒素論壇)
        對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的非選擇性吸附還有爭(zhēng)議,如存在,因其在處理(離子置換、分子修飾、電荷修正)過程中改善了礦物質(zhì)的理化性質(zhì)(如疏水性),使其添加量較低,對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸附性也大大降低。
        產(chǎn)生作用的添加量較低,0.25 ‰ --2 ‰(根據(jù)處理工藝的優(yōu)劣和霉菌毒素的含量)。

成份分類 --生物活性類(微生物和酶)
        微生物(牛瘤胃中提取、豬胃中提?。?br />         酶制劑(牛瘤胃/豬胃中提取的微生物分泌)
思考問題
        豬胃內(nèi)是否有這樣的微生物?
        酶發(fā)揮最大活性的條件能否達(dá)到?
   75℃時(shí)活性100%,80 ℃時(shí)活性97%,說明其在高溫下有高活性,動(dòng)物胃內(nèi)溫 度能否保證其產(chǎn)生最大活性 ?其他的影響因素?(數(shù)據(jù)來自其說明書)
        對(duì)蓄積在靶器官內(nèi)的毒素如何分解?毒素分解酶如何轉(zhuǎn)運(yùn)到靶器官?
        是否有完整的酶系,將毒素的毒性基團(tuán)徹底代謝為無毒物質(zhì)?
        是否有幾十種毒素的分解酶?
   理論文章可參見2008-06-04南方農(nóng)村報(bào) 建明工業(yè)(珠海)技術(shù)部 黃廣明

成份分類 – 糖類
        來自酵母細(xì)胞壁(酯化葡甘露聚糖 EGM)
    從理化性質(zhì)上分析,EGM有很好的比表面積和較好穩(wěn)定性
    主要是其氫鍵和范德華力與毒素結(jié)合,打開毒素的內(nèi)酯環(huán)
                  
思考問題
        大量的體外實(shí)驗(yàn)表明其有一定的吸附毒素能力,但體內(nèi)實(shí)驗(yàn)效果差,為什么?
        在巴西不能通過LAMIC實(shí)驗(yàn)室效果測(cè)定,只能作為免疫增強(qiáng)劑使用,巴西是如何思考的?
思考問題--我的答案
        不理想的體內(nèi)吸附效果是不是主要成分EGM被動(dòng)物機(jī)體的微生物利用了,而沒有產(chǎn)生吸附作用?
        在巴西LAMIC實(shí)驗(yàn)室效果測(cè)定,在0.5KG/T使用時(shí),只有26.30%的吸附效果,不能通過批準(zhǔn),但可以作為免疫增強(qiáng)劑使用。
       
巴西 LAMIC 獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室--體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果
樣品(p/v)        粘土類(USA產(chǎn)品)        EGM類(USA產(chǎn)品)        粘土和酶類復(fù)合物(SPAIN產(chǎn)品)
0.50        96.50        63.00(2.2 )        96.50
0.20        96.50         NA        90.00(0.4)
0.10        96.50        47.20(0.0 )        72.30(2.0 )
0.05        94.3(1.0)        26.30(4.5)        54.00(1.0)

成份分類 – 綜合類
        礦物質(zhì)(蒙脫石、膨潤(rùn)土等)
        微生物(來自動(dòng)物消化道,如牛瘤胃)
        中草藥提取物(免疫增強(qiáng))
        藻類提取物(免疫增強(qiáng))
思考問題
        微生物和酶發(fā)揮最大活性的條件?健康牛瘤胃內(nèi)的微生物對(duì)毒素的分解能力只有30%--50%,在豬胃內(nèi)有效率是多少?
  (溫度、PH值、陰陽離子和抗生素對(duì)其活性的影響)
        微生物定植在消化器官表皮的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)有多大?
        對(duì)蓄積在靶器官內(nèi)的毒素如何分解?
        是否能有完整的酶系?
        是否能產(chǎn)生幾十種毒素的分解酶?













上圖是***提供給韓國(guó)制造司的吸附分解黃曲霉毒素B1技術(shù)資料
◆商品使用量是2%,就是每噸飼料添加它2公斤,pH6的話,平均可能吸附90%,而說明書中的勸告使用量是0.5KG/T
◆圖下面的礦物質(zhì)是***公司使用的



進(jìn)口真假鑒別
√看價(jià)格:海運(yùn)費(fèi)、關(guān)稅、通關(guān)費(fèi)和其他費(fèi)用每公斤約5~8元(按單次進(jìn)口100T測(cè)算),價(jià)格偏低多數(shù)為假進(jìn)口
√看包裝:進(jìn)口產(chǎn)品基本為20~25KG包裝,無小包裝
√查批號(hào):上農(nóng)業(yè)部網(wǎng)站搜索其產(chǎn)品批號(hào),看是否有批號(hào)或批號(hào)與產(chǎn)品是否一致
√看通關(guān)手續(xù):通關(guān)要辦理大量的手續(xù),要求提供復(fù)印件

產(chǎn)品選擇
√看認(rèn)證:無檢驗(yàn)條件的單位看其是否有效價(jià)認(rèn)證單位,全球五大  
          獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室任意一個(gè)(最好是LAMIC實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證)
 ISO9000/ISO9001/HACCP不是效價(jià)認(rèn)證,是生產(chǎn)程序認(rèn)證
√看成份:最好是粘土類產(chǎn)品(有效價(jià)認(rèn)證的)
√看品牌:目前國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品的研制水平有限,最好選國(guó)際品牌
√看添加量:相對(duì)添加量越低越好


巴西LAMIC實(shí)驗(yàn)室


        成立于16年前,是世界前五位的霉菌毒素獨(dú)立研究實(shí)驗(yàn)室,也是目前世界上最嚴(yán)格的霉菌毒素檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。目前通過此實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)驗(yàn)證的霉菌毒素吸附劑類產(chǎn)品對(duì)黃曲霉有效的有15個(gè)產(chǎn)品,對(duì)ZEN有效的有3個(gè)產(chǎn)品,對(duì)串珠鐮刀菌毒素有效只有2個(gè),且全部為粘土類產(chǎn)品。
        LAMIC實(shí)驗(yàn)室效價(jià)檢測(cè)方案
1、體外模擬實(shí)驗(yàn),對(duì)毒素處理水平達(dá)到80%的通過;
2、體內(nèi)實(shí)驗(yàn),通過對(duì)靶器官毒素水平的檢測(cè)和對(duì)生產(chǎn)性能的影響檢測(cè),處理毒素水平達(dá)到80%,并對(duì)生產(chǎn)性能無統(tǒng)計(jì)差異顯著影響的通過,可批準(zhǔn)銷售;
3、每隔6個(gè)月一次的體外實(shí)驗(yàn)和每2年一次的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)檢測(cè),觀察產(chǎn)品質(zhì)量是否一致。
作者: bonderic    時(shí)間: 2009-9-3 09:47
非常嚴(yán)謹(jǐn)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室室,值得尊敬和學(xué)習(xí)。
作者: ldf_0306    時(shí)間: 2009-10-8 14:01
國(guó)內(nèi)產(chǎn)品沒有經(jīng)得起檢驗(yàn)的
作者: bqsong    時(shí)間: 2009-10-16 10:38
LZ 你的思考思路很對(duì),但是很多基本概念搞錯(cuò)了!彭潤(rùn)土主要成分是蒙脫石,蒙脫石是由于在蒙脫一個(gè)地方發(fā)現(xiàn)的所以命名蒙脫石。還有粘土類和二者也有重疊部分,哈哈,吸附劑方面研究的還不夠,多多作作功課!
作者: 牛莫王    時(shí)間: 2009-10-17 19:39
又是個(gè)神棍,目前市場(chǎng)還沒理想的產(chǎn)品!!?。。。。。。?!
作者: cheng_zhang    時(shí)間: 2009-10-20 09:00
本帖最后由 cheng_zhang 于 2009-10-20 09:16 編輯

[quote]引用自dlmang 發(fā)表于 2009-9-1 19:07的內(nèi)容
先說一個(gè)分解類的產(chǎn)品,酶解當(dāng)然是一個(gè)最好的辦法,但這就像人能瞬移(動(dòng)畫片中一個(gè)人從一個(gè)地方一下就能到想去的另一個(gè)地方,或者說是什么時(shí)空半遂道)一樣,可想但還做不到,當(dāng)然這個(gè)技術(shù)可能比瞬移實(shí)現(xiàn)容易得多。現(xiàn)在的問題是,當(dāng)毒素進(jìn)入體內(nèi)后,一般會(huì)轉(zhuǎn)移到一個(gè)主要器官,比如黃曲霉毒素B1之肝臟,毒素會(huì)在肝臟內(nèi)被體內(nèi)的一些霉分解,比如打開毒素的某些特定基團(tuán)或化學(xué)鍵,如內(nèi)酯環(huán),低速毒性降低,然后再進(jìn)行一系列的反應(yīng),最終代謝成無毒物質(zhì),排出體外。問題1:這個(gè)毒素的分解需要一組酶,也就是說是一個(gè)酶系,只能代謝成低毒的物質(zhì),這是不完全解毒。問題2:毒素轉(zhuǎn)移到特定器官后,分解毒素的酶是如何轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟的?酶是蛋白質(zhì),不可能從消化道直接進(jìn)入血液,然后在肝臟等特定器官去分解毒素。問題3:酶的活性問題:酶只有在特定的PH值、壓力、溫度等條件下才能產(chǎn)生作用,現(xiàn)在的技術(shù)水平生產(chǎn)出來的酶(暫且認(rèn)為能生產(chǎn))是否適合動(dòng)物的消化道哪?舉個(gè)例子,溫度降10度,酶活下降一半,下降20度、30度還能剩下多少哪?問題4:現(xiàn)在的毒素有幾十個(gè)類幾百上千個(gè)種(可能說的不科學(xué)),且每一個(gè)都需要一組酶,這個(gè)問題何年何月可完全解決啊?就算是現(xiàn)在研究成熟的幾個(gè),如AFB1、ZEN、T-2、OTA、煙曲霉、F-2等吧,就有十幾個(gè),可能得需要幾個(gè)酶才能解決……
目前歐洲還不認(rèn)為能生產(chǎn)出這樣的酶能解決毒素問題,不過在咱這好像被說的很神,至于為什么有一定效果,咱們下回分解。[/quot e]

老兄,就你所說的幾個(gè)問題,我試著給你答復(fù),以百奧明公司產(chǎn)品百安明為例。同時(shí)也希望澄清一些錯(cuò)誤的觀念。
問題1:毒素分解需要很多酶(酶系)嗎?答案是否定的。對(duì)于單端苞菌霉烯這一族總共170多種霉菌毒素來說,他們的毒性是因其12,13位碳原子上的環(huán)氧基而產(chǎn)生的(見cast報(bào)告)。因此把這個(gè)環(huán)氧基去掉就可以脫毒。我只需要一個(gè)叫“脫環(huán)氧基酶”的就可以把這170多種霉菌毒素都脫毒。對(duì)于玉米赤霉烯酮,其毒性是因其分子結(jié)構(gòu)與雌激素非常類似而產(chǎn)生。脫毒策略是把球性的結(jié)構(gòu)變?yōu)橹辨溞徒Y(jié)構(gòu),使其跟雌激素決然不同。這只需要一種酯化酶即可。而對(duì)于黃曲霉毒素,目前最經(jīng)濟(jì)有效的方法還是吸附脫毒。當(dāng)然還有其他的霉菌毒素如赭曲霉毒素、煙曲霉毒素等等(總共有400多種霉菌毒素),要做到全部生物轉(zhuǎn)化脫毒尚需時(shí)日。百安明產(chǎn)品中并不是一個(gè)單一的成分,而是把多種酶和活菌(產(chǎn)生酶的)復(fù)合在一起,因此它可以做到一個(gè)產(chǎn)品解決多種霉菌毒素,而且都是目前研究比較多的、對(duì)動(dòng)物危害比較大的幾種霉菌毒素。
問題2:脫毒是在動(dòng)物什么器官發(fā)生?如果等到動(dòng)物進(jìn)入到血液循環(huán)甚至運(yùn)輸?shù)礁鹘M織器官再脫毒的話,為時(shí)晚矣!脫毒應(yīng)該在動(dòng)物胃腸道內(nèi)、在毒素被吸收之前就必須發(fā)生。因此你說的轉(zhuǎn)運(yùn)問題不存在。
問題3:酶的活性問題。確實(shí)如你所說,各種酶達(dá)到最大酶活時(shí)所需的溫度可能是不同的。百安明產(chǎn)品中所用的酶最適宜溫度稍高,大概在40度。但并不是說溫度在37度或者42度它就沒有酶活,只是沒有達(dá)到最大酶活而已。動(dòng)物消化道內(nèi)溫度可能能相差10度嗎?頂多幾度而已(變溫動(dòng)物除外)。
問題4:現(xiàn)在已知的霉菌毒素有400多種,但真正了解的也就10來種而已。首先我們需要了解他們,然后才談得上解決他們。因此我們現(xiàn)階段的目標(biāo)是把已經(jīng)了解的、對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)影響比較大的幾種霉菌毒素解決掉。這樣就縮小到幾種霉菌毒素(黃曲霉毒素、包括嘔吐、T-2、DAS在內(nèi)的單端苞菌霉烯毒素、玉米赤霉烯酮、煙曲霉毒素和赭曲霉毒素)。至于其他霉菌毒素,隨著科學(xué)發(fā)展,自然會(huì)有更多認(rèn)識(shí),會(huì)有更多的解決方法。
作者: cheng_zhang    時(shí)間: 2009-10-20 09:09
引用自dlmang 發(fā)表于 2009-9-1 20:47的內(nèi)容
補(bǔ)充一個(gè)問題5:能分解毒素的酶的來源問題,這樣的特種酶的合成是比較困難的,更不可能進(jìn)行商業(yè)化運(yùn)做,唯一的辦法就是找到一種微生物培養(yǎng),使其產(chǎn)酶。這種微生物的從哪里來,或者上哪去找?有人說牛的瘤胃里有這咱微生物,這里就出現(xiàn)了兩個(gè)問題1):牛也會(huì)出現(xiàn)毒素中毒,成年牛的解毒能力也不強(qiáng),好像有資料說最多30%-45%這樣,也就是說這種微生物及其分泌的酶的解毒能力很一般。2):瘤胃內(nèi)的PH值等各種理化環(huán)境和豬與禽等單胃動(dòng)物有很大的區(qū)別,在瘤胃內(nèi)的酶到豬或禽的胃內(nèi)還有多少酶活?也有人說是來自豬的胃(不知道是不是個(gè)笑話),如果豬胃內(nèi)有這種微生物或酶,我想需要讓動(dòng)物中毒,這個(gè)劑量得夠大。說能分解的好像都是歐洲的產(chǎn)品,而且還很貴。


補(bǔ)充問題的補(bǔ)充回答: 為什么不能商業(yè)化運(yùn)作?不要妄下斷言。明確的說,百安明產(chǎn)品的某些產(chǎn)分是從瘤胃中提取的。瘤胃微生物對(duì)嘔吐毒素的脫毒效率比較高,我們提起某些成分用于嘔吐毒素脫毒。瘤胃微生物可以將玉米赤霉烯酮轉(zhuǎn)化成玉米赤霉烯醇,而后者的毒性是前者的10倍(對(duì)牛)。因此玉米赤霉烯酮對(duì)牛的危害是非常大的。你應(yīng)該把解毒能力30-45%更明確的說明一下,是對(duì)什么毒素的解毒能力?至于pH、溫度等等條件,我在上面已經(jīng)回答了。不羅嗦。
作者: cheng_zhang    時(shí)間: 2009-10-20 09:19
9# dlmang
關(guān)于巴西的LAMIC實(shí)驗(yàn)室,他們有一個(gè)對(duì)百安明的測(cè)試,具體結(jié)果大家可以到他們的網(wǎng)站上看看。http://www.lamic.ufsm.br/aam/index.html ,用戶名mycotoxin, 密碼 deactivation 。這個(gè)測(cè)試證明百安明對(duì)黃曲霉毒素和玉米赤霉烯酮是有效的。
作者: 牛莫王    時(shí)間: 2009-10-20 10:37
你問一下百奧明公司還有那些霉菌毒素他們沒辦法解決??????如果都能解決!我推薦參與諾貝爾獎(jiǎng)評(píng)選!
作者: dlmang    時(shí)間: 2009-12-14 21:46
http://www.lamic.ufsm.br/aam/index.html ,這個(gè)網(wǎng)站我看了,是西班牙文的,翻譯好費(fèi)勁,但沒看到對(duì)效果的評(píng)定,只是說明有一個(gè)事,在2007年7月25,沒有檢測(cè)效果給出.如下:
Nome do produto Mycofix Plus 3.0
Espécie Animal Testada Suínos
Micotoxina Analisada Zearalenona
Concentração do Produto 0,5%
Data da Avaliação 25/07/2007
Laudo in vivo  250707
Resultado do teste in vivo Aprovado
Validade do teste in vivo 25/07/2009
Resultados do teste in vitro NR
翻譯如下:
名稱介紹頁面Mycofix加3.0
動(dòng)物物種豬全測(cè)試
分析霉菌毒素玉米赤霉烯酮
Concentração做產(chǎn)品介紹頁面0.5%
25/07/2007數(shù)據(jù)大評(píng)分


這樣的結(jié)果能不能獲諾獎(jiǎng)我就做不了主了.
我希望能過這樣一次討論能找出個(gè)真正好的產(chǎn)品來,別再花大價(jià)錢被別人耍了.
獎(jiǎng)體內(nèi)250707
Resultado做泰斯特體內(nèi)核定
Validade做泰斯特體內(nèi)25/07/2009
搜尋結(jié)果做泰斯特體外星期日
作者: dlmang    時(shí)間: 2009-12-14 21:47
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