畜牧人

標(biāo)題: 在發(fā)酵的角度廓清“后抗生素時代”的含義 [打印本頁]

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:41
標(biāo)題: 在發(fā)酵的角度廓清“后抗生素時代”的含義
大家都說“后抗生素時代”，除了歐盟禁抗帶來的畜牧行業(yè)的緊迫外，它的含義還有另一個。n

那就是，在以往（2005-2006以前），發(fā)酵處于抗生素時代?？股貢r代的含義，是指，以抗生素工藝代表最高發(fā)酵技術(shù)，引導(dǎo)行業(yè)。以抗生素工藝評價體系為整個發(fā)酵行業(yè)的指導(dǎo)。也即，抗生素發(fā)酵工藝，指導(dǎo)了有機(jī)酸（主要檸檬酸）行業(yè)，氨基酸（主要味精）行業(yè)的生產(chǎn)構(gòu)成體系。
抗生素發(fā)酵，是經(jīng)典發(fā)酵的代表。

所謂后抗生素時代，指進(jìn)入分子時代后，工程菌由于自身原因不適應(yīng)以抗生素發(fā)酵為指導(dǎo)，而自身發(fā)展了一種開發(fā)，生產(chǎn)，和評價體系。工程菌株的高精度控制發(fā)酵，代表了行業(yè)的最高水平。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:45
后抗生素的時代特點(diǎn)，有點(diǎn)和經(jīng)典發(fā)酵時代不同，在經(jīng)典發(fā)酵時代，抗生素工藝技術(shù)涵蓋了，指導(dǎo)了整個發(fā)酵行業(yè)，但后抗生素時代，分子技術(shù)和工程菌發(fā)酵技術(shù)，并不能代表整個行業(yè)。

它與經(jīng)典發(fā)酵，即抗生素工藝指導(dǎo)下的發(fā)酵，是同時存在的。這一點(diǎn)，與抗生素時代不同。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:46
下面，以蛋白表達(dá)為例，大致闡述下后抗生素時代的技術(shù)過程，然后，再做一下對比。

先闡述大致工藝過程：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:48
蛋白表達(dá)的技術(shù)與工藝概述

在分子生物學(xué)角度講，找到或合成外源蛋白基因，構(gòu)建質(zhì)粒，并導(dǎo)入細(xì)胞以表達(dá)具有生物活性的折疊正確的蛋白，是一種成熟的常規(guī)技術(shù)。目前，包括酶，抗原，抗體，激素，其他小分子調(diào)節(jié)蛋白在內(nèi)的很多蛋白，都已經(jīng)用這種技術(shù)實(shí)現(xiàn)了工業(yè)化生產(chǎn)。在具體的工藝選擇上，歷史沿襲習(xí)慣和表達(dá)體系的選擇，對工藝穩(wěn)定性，成本，有巨大的影響。

目前，常用的蛋白表達(dá)系，有3個類別：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:51
1，大腸桿菌表達(dá)系。
大腸桿菌的遺傳背景十分清楚，代謝相對簡單，發(fā)酵副產(chǎn)物少，在不是很嚴(yán)格的情況下，是表達(dá)蛋白的首選。通過按經(jīng)驗(yàn)選擇合適的菌株及合適的質(zhì)粒，既可以以包涵體的形式得到大量的目標(biāo)蛋白，又可以在細(xì)胞外得到可溶性蛋白，是常見的一種表達(dá)系。

2，酵母菌表達(dá)系。
用酵母做表達(dá)系，理由之一，也是遺傳背景清楚，而且，當(dāng)?shù)鞍追肿恿窟^小，不能形成包涵體時，或蛋白的二硫鍵過多，不易體外復(fù)性時，酵母菌就成了合適的選擇。另外，酵母對蛋白也會有一個簡單的修飾，近似于高等動物的蛋白糖基化過程。這樣，在合成在體液中發(fā)揮作用的蛋白，而且，又不能（技術(shù)水平限制）用動物細(xì)胞時，就可以退而求其次的選用酵母菌表達(dá)。一般是用信號肽把蛋白導(dǎo)出細(xì)胞，在發(fā)酵液中以可溶性蛋白的形式存在。這也是一個常見的表達(dá)系。

3，動物（或說，人的）細(xì)胞表達(dá)系。
這種情況，在純度或毒性方面有較高要求的產(chǎn)品應(yīng)用。一般國外產(chǎn)品應(yīng)用較多，國內(nèi)還沒有用動物細(xì)胞表達(dá)蛋白實(shí)現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)的報道。由于技術(shù)限制，國內(nèi)工業(yè)化生產(chǎn)用這個方法目前還有較大難度。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:52
這3種表達(dá)系，各自有自己的優(yōu)缺點(diǎn)。首先，在潛在的毒性影像方面講，由于和真核生物親緣關(guān)系太遠(yuǎn)，大腸桿菌就最不合適。其次是酵母菌。而在表達(dá)量和代謝控制成本上來講，酵母菌和動物細(xì)胞又是差強(qiáng)人意的?，F(xiàn)在，很多蛋白習(xí)慣性的選用酵母菌做表達(dá)系，就是因?yàn)樵缙谔崛〉鞍准夹g(shù)低下，而動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)又不過關(guān)的原因所致。目前，雖然提取工藝提高了，但作為蛋白這種高附加值產(chǎn)品，運(yùn)作成本集中在銷售而不是生產(chǎn)，所以，降低生產(chǎn)成本的訴求很低。站在降低開發(fā)難度的角度講，一方面，質(zhì)粒構(gòu)建和質(zhì)粒與菌株的匹配方面依賴大量經(jīng)驗(yàn)，另一方面，發(fā)酵工藝策略選擇與發(fā)酵工藝優(yōu)化又需要很大的投入，所以，技術(shù)開發(fā)部門沿用自己熟悉的，已經(jīng)積累了大量經(jīng)驗(yàn)的表達(dá)系，是合理的。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:53
不過，隨著分子技術(shù)進(jìn)一步的發(fā)展，分子技術(shù)進(jìn)入低附加值的產(chǎn)品領(lǐng)域又是必然的，降低生產(chǎn)成本就變的越來越必要了。

大腸桿菌表達(dá)系有兩種得到外源蛋白的方法：

1，緩慢的表達(dá)，得到可溶性蛋白，這種方法產(chǎn)量和酵母菌表達(dá)類似，與酵母菌比，不具有明顯的優(yōu)勢，一般是有做大腸桿菌傳統(tǒng)的研究機(jī)構(gòu)生產(chǎn)小分子蛋白的一種沿襲性做法。

2，使用T7啟動子表達(dá)蛋白，這樣，高速的蛋白表達(dá)速率使蛋白來不及折疊，在細(xì)胞內(nèi)形成非水溶性的包涵體。最后目標(biāo)蛋白可以達(dá)到總細(xì)胞質(zhì)量的15%-25%，這樣，就為降低成本提供了一種可能。

不過，在使用T7啟動子表達(dá)時，也存在兩個難點(diǎn)：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:55
1，蛋白的復(fù)性技術(shù)，如果形成可溶性蛋白，那利用（使用分子技術(shù)加載在目標(biāo)蛋白上）信號肽，只要過一遍柱子就能分離得到純度非常高的，具有生物活性的產(chǎn)品，而形成包涵體，對提取，復(fù)性就有較高的要求，特別是二硫鍵的存在，會對復(fù)性產(chǎn)生很大的影響。在目前國內(nèi)和國際流行技術(shù)看，并不是所有的蛋白都能在預(yù)定成本下復(fù)性的。

2，任何情況下，高產(chǎn)都是代謝網(wǎng)絡(luò)互相依賴與作用的結(jié)果。在如此高的表達(dá)量下，甚至細(xì)胞的形態(tài)都已經(jīng)發(fā)生很大變化，正常代謝受到嚴(yán)重干擾，以至于放大時，搖瓶工藝對發(fā)酵工藝幾乎沒有任何參考價值。發(fā)酵工藝策略的選擇將直接依賴于工程人員在生化，生理水平對菌株的理解，而匱乏可資參考的數(shù)據(jù)資料。發(fā)酵工藝的優(yōu)化要離開搖瓶經(jīng)驗(yàn)在發(fā)酵罐上逐步進(jìn)行，這樣，整個發(fā)酵工藝的確立就需要比想象中要大得多的人員與時間的投入。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:56
另外，再說一下糖基化的問題。

在動物細(xì)胞內(nèi)合成的折疊正確的蛋白，在分泌入體液前會有一個糖基化的過程，加上一個糖鏈就不會很快被蛋白酶當(dāng)做折疊錯誤的蛋白水解掉。但是以微生物為表達(dá)系表達(dá)的蛋白，不具有動物細(xì)胞的修飾過程，用大腸桿菌表達(dá)的目標(biāo)蛋白，很快會在血液中被降解。解決或回避這個問題，有兩種方法：

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:58
1，用動物細(xì)胞表達(dá)，一般，是用癌化的人類細(xì)胞。由于動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)要求過高，在國外比較昂貴的醫(yī)藥中有應(yīng)用，國內(nèi)不常見。

2，由于酵母菌也有一個對蛋白的粗略的修飾過程，可以用酵母菌表達(dá)目標(biāo)蛋白。這個技術(shù)，國內(nèi)國外都在用，可以是一個權(quán)宜之計(jì)。主要難點(diǎn)集中在對合適菌株的分子水平的改造，以達(dá)到盡可能接近滿意的修飾效果。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 21:59
這樣，就可以在不同目標(biāo)蛋白上表達(dá)系和發(fā)酵工藝上做出選擇。如果是小分子，無糖基化修飾或不在體液中發(fā)揮作用的蛋白，可以選擇大腸桿菌和酵母菌表達(dá)系，得到可溶性蛋白，然后提取。如果分子量合適，并對生產(chǎn)成本有訴求，而且可以比較方便的復(fù)性，則選用大腸桿菌表達(dá)系，得到包涵體，然后復(fù)性。如果是需要在體液中發(fā)揮活性并有糖基化要求的蛋白，則選用經(jīng)過分子生物學(xué)改造的酵母菌表達(dá)系。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:01
下面，以溶菌酶為例，闡述一下蛋白表達(dá)系的選擇和工藝的確定。

溶菌酶是一類具有種屬差異的非特異性免疫物質(zhì)，在動物界中普遍存在，種類繁多，其實(shí)，在植物和微生物中也有發(fā)現(xiàn)。但研究最多的還是動物。開發(fā)獸用溶菌酶，主要是想作為抗生素的替代物，作為添加劑使用。因此是一個低附加值的產(chǎn)品。下面一切的工作，都會圍繞“獸用”和“低附加值”展開。

首先，我們比較了幾種常見和認(rèn)為有效的溶菌酶，我們發(fā)現(xiàn)，殺菌效果最好的是人的溶菌酶，但考慮到潛在的危險（具有對人溶菌酶產(chǎn)生抗性，并使抗性基因擴(kuò)散），我們舍爾求其次，用了鳥類蛋清溶菌酶，作為表達(dá)對象。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:02
然后，在得到溶菌酶蛋白的一級結(jié)構(gòu)后，我們對此進(jìn)行了分析。此蛋白不會用于體液內(nèi)，故沒有糖鏈修飾的問題。分子量不是很大，但也不太小，130左右的氨基酸構(gòu)成，足以形成包涵體，這就為用大腸桿菌表達(dá)系高效表達(dá)提供了可能。討厭的是有4個二硫鍵，其中有兩個在結(jié)構(gòu)復(fù)雜區(qū)域，折疊正確有一定的困難。但是，如果用酵母菌做，可能沒法解決成本問題，即便優(yōu)化工藝現(xiàn)在過去了，也不會是最終版本----肯定會有人用大腸桿菌做。所以，結(jié)論就是必須知難而進(jìn)，拿下復(fù)性工藝。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:03
另外，由于是低附加值產(chǎn)品，發(fā)酵噸位就不能太小。以往分子生物學(xué)流行的50升，100升小罐發(fā)酵，肯定是不行的。發(fā)酵罐的放大，除了溶氧，剪切力發(fā)生變化，更重要的是攪拌線速度改變了胞外酶以及包括細(xì)胞本身的代謝方式和速度。在胞內(nèi)體現(xiàn)就是氧化還原電勢的改變，這在工藝上會帶來很多麻煩。雖然說，一般是放大后產(chǎn)量往往提高，但放大過程中，小罐的經(jīng)驗(yàn)就不能照搬了。同時，也因?yàn)槭堑透郊又诞a(chǎn)品，發(fā)酵過程中諸如質(zhì)粒丟失等穩(wěn)定性要求，就很高了，應(yīng)為只有穩(wěn)定，才能控制成本。這樣，工藝就成了第二個難點(diǎn)。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:05
明白這些之后，我們按照大腸桿菌的喜好，合成了溶菌酶的基因。然后構(gòu)建質(zhì)粒，導(dǎo)入細(xì)胞。在搖瓶水平表達(dá)溶菌酶。在篩選復(fù)性條件的同時，我們就同時在發(fā)酵罐水平對工藝穩(wěn)定性進(jìn)行了優(yōu)化。

首先，為了進(jìn)一步提高質(zhì)粒穩(wěn)定性，我們對初始培養(yǎng)基進(jìn)行了重新設(shè)計(jì)。并改動發(fā)酵工藝策略，由于是胞內(nèi)產(chǎn)物，我們應(yīng)用高細(xì)胞密度發(fā)酵控制法延長限制性生長時間（不能用經(jīng)典發(fā)酵的延長對數(shù)期生長時間的辦法，對工程菌不適合，會造成質(zhì)粒丟失，代謝紊亂等一系列問題），提高細(xì)胞量，并改變了誘導(dǎo)時機(jī)，得到了穩(wěn)定的高產(chǎn)，具體數(shù)據(jù)比較枯燥，就不在此展開了。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-5-17 22:06
提取方面，經(jīng)過不懈的努力，我們也掌握了比較成功的復(fù)性條件（具體由另外人員負(fù)責(zé)，也不做詳細(xì)介紹了）。這樣，工藝才基本拼湊好。進(jìn)一步優(yōu)化，在試生產(chǎn)多次重復(fù)時在進(jìn)行。

以上，是外源蛋白表達(dá)的粗略的一個技術(shù)和工藝的過程。

[ts]葉赫娜蘭-孤城于 2009-6-2 09:10 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

沒人回，自己回。

很無聊的，但該補(bǔ)充的還是補(bǔ)充下，萬一有人看呢？

還有兩個表達(dá)系,也比較常用：乳酸菌和芽孢桿菌。都是細(xì)菌。

作者: 孟俊英 時間: 2009-7-3 19:33
看過了，一氣呵成。你的這些太專業(yè)了，我還要好好轉(zhuǎn)化一下。:)3:畜牧微生物學(xué)雖然是畜牧業(yè)的一個重要分枝，但做酸奶、乳酪的工藝流程才是核心，不過溶菌酶的研發(fā)關(guān)乎今后的飼料養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展，希望你堅(jiān)持下去，同道會越來越多的。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-7-4 11:12
謝謝俊英君的鼓勵。

現(xiàn)在還是有些困難的，真做工藝了，在設(shè)備擴(kuò)大和選型，物料平衡等一些常規(guī)問題上，遇到阻力。--主要還是成本，在這個壓力下，有可能重新回到工程菌構(gòu)建上，重新設(shè)計(jì)構(gòu)建方案，重新開始。

做抗生素出身，雖然作過研發(fā)和生產(chǎn)，對成本還是大意了。慚愧:liuhan:

好在是小試，損失還談不上。嘿嘿。

作者: 東方龍 時間: 2009-7-5 00:28
21世紀(jì)是基因工程的時代，我堅(jiān)信這一天遲早要到來，基因工程，發(fā)酵工程，蛋白（酶）工程，細(xì)胞工程。真正意義上的分子時代

[ts]東方龍于 2009-7-5 00:29 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

溶菌酶也是好東西，我更堅(jiān)信。因?yàn)槲乙恢痹趫?jiān)持使用！?。。。。。。?！

作者: kltdzhong 時間: 2009-7-5 02:41
隨著技術(shù)的進(jìn)步應(yīng)該會代替抗生素吧。

作者: 孟俊英 時間: 2009-7-5 10:24
樓主的目標(biāo)蛋白是禽溶菌酶，因選用大腸桿菌表達(dá)系而增加了蛋白復(fù)性的難度，重點(diǎn)是解決菌種和工藝問題，任重道遠(yuǎn)，支持支持，希望不久的將來有成功的溶菌酶產(chǎn)品面世。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-7-21 08:52
感謝諸君的鼓勵和期待，孤城一定多多努力----讓別人努力（玩笑，呵呵）。

作者: 學(xué)農(nóng)愛農(nóng) 時間: 2009-8-17 11:02
后抗生素時代，不是對于抗生素功過的評判，而是對于新型功能性添加劑的研發(fā)。
樓主的專業(yè)專注，讓人敬佩！盡管曲高和寡，呵呵，研發(fā)就要耐得寂寞。
溶菌酶的生產(chǎn)工藝，相信也不是什么世界級難題。只是我們的專家考慮到成本控制，對于自己提高了鉆研層次。
不僅僅溶菌酶，許許多多的功能性產(chǎn)品都是在應(yīng)用中逐步清晰成熟的，一如人的成長，需要時間，需要鍛煉，需要修正，需要創(chuàng)新！
每一步都是付出，每一步都有成就！惟有虔誠的祝福：一路走好，祖國的畜牧業(yè)！

作者: xqcgy 時間: 2009-8-17 16:23
所謂后抗生素時代，指進(jìn)入分子時代后，工程菌由于自身原因不適應(yīng)以抗生素發(fā)酵為指導(dǎo)，而自身發(fā)展了一種開發(fā)，生產(chǎn)，和評價體系。工程菌株的高精度控制發(fā)酵，代表了行業(yè)的最高水平。

作者: 孟俊英 時間: 2009-8-17 19:42
24樓對分子發(fā)酵的理解相當(dāng)精到，事實(shí)上也是如此，由于單一、大量表達(dá)某個蛋白，工程菌的生命力都比較弱；發(fā)酵過程控制更為關(guān)鍵 24# xqcgy

作者: 東方龍 時間: 2009-8-27 10:13
樓主的專業(yè)專注，讓人敬佩！我們盡管不能搞科研創(chuàng)新，但我們能作為科學(xué)成果的推廣者和傳播者

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-8-29 12:45
26# 東方龍 謝謝龍兄鼓勵。對分子生物學(xué)在畜牧的應(yīng)用，我也希望早日出一個工業(yè)水平的答復(fù)。

作者: tian11aiguo 時間: 2009-8-31 11:12
樓主的專業(yè)理論很是專業(yè)，我有些不懂，學(xué)習(xí)了。。。。。

作者: wubai8219 時間: 2009-9-14 09:56
太專業(yè)了得慢慢消化！

作者: liping 時間: 2009-10-11 09:56
有意思，有見解，在發(fā)酵方面確實(shí)功底扎實(shí)，樓主這種水平，如果年薪未曾拿到100W，實(shí)在有違天意，如果還在高校，可以做一個公司，在發(fā)酵上面大做文章。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-10-11 10:16
30# liping 哈哈，謝謝liping兄錯愛。

兄弟在高校不錯，可是并未想要開公司。實(shí)話實(shí)說，作為一個工程人員，而不是純粹的理科科研人員，在實(shí)驗(yàn)室，雖然是有事可做的，但在學(xué)校，位置卻是尷尬的，年薪100w是想都沒敢想啊。

作者: 廖綠杰 時間: 2009-10-12 13:00
樓主的專業(yè)令人欽佩，對發(fā)酵工藝的嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真和精辟分析更令我敬佩，頂了！

作者: horsegreenhill 時間: 2009-10-13 23:43
敢問孤城兄，您現(xiàn)在是不是正在做這個課題？

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2009-10-14 08:52
是啊?，F(xiàn)在已經(jīng)構(gòu)建到第三個菌株，更換了兩次工藝策略，以期得到理想的成本。 34# horsegreenhill

[ts]葉赫娜蘭-孤城于 2009-10-14 08:54 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

引用自葉赫娜蘭-孤城發(fā)表于 2009-10-11 10:16的內(nèi)容
30# liping 哈哈，謝謝liping兄錯愛。

兄弟在高校不錯，可是并未想要開公司。實(shí)話實(shí)說，作為一個工程人員，而不是純粹的理科科研人員，在實(shí)驗(yàn)室，雖然是有事可做的，但在學(xué)校，位置卻是尷尬的，年薪100w是想都沒

“知易行難,理論易學(xué),真要出產(chǎn)品就不容易了,所以年薪未曾拿到100W，是很正常的 ”

狗王兄，您在想想，是這么回事嗎？

作者: horsegreenhill 時間: 2009-10-14 19:15
本帖最后由 horsegreenhill 于 2009-10-14 21:05 編輯

我們也在做相關(guān)的課題，希望以后多多交流！

作者: 東方龍 時間: 2009-10-28 17:33
早日愿君年薪100W:)3::)3::)3:

作者: 牧羊雪 時間: 2010-1-29 14:37
在物欲橫流的時代，有如此多的精英，耐得住寂寞與誘惑，靜下心來默默從事畜牧行業(yè)的里程碑式的、劃時代變革的事業(yè)。

支持中，敬佩中。

行業(yè)內(nèi)羊頭狗肉之案例太多了。期望樓主成功。

作者: 劉小雁 時間: 2010-2-23 11:19
向?qū)I(yè)人士學(xué)習(xí)！

作者: 李向陽 時間: 2010-3-14 14:09
畜牧人論壇是業(yè)界全國最好的論壇，注意，沒有之一。比之灌水論壇的天涯、貓撲的地位。但我極端鄙視一些所謂專業(yè)人，他們天天說用這個藥不好，那個藥不好。又是對人不好，又是危害環(huán)境。但養(yǎng)殖業(yè)是怎么回事你們這些人又不是不清楚，凡是說實(shí)話的你們就說不好，你們到底是什么居心。如同現(xiàn)在非要說妓女下賤，你養(yǎng)個二奶就好了？又是中藥、又是微生態(tài)，一會又鼓搗出來一堆學(xué)術(shù)術(shù)語，生物制劑、提取物。難道這些東西最終起作用的不是化學(xué)品？到底是中藥無毒，還是生物制劑就很安全？你們?nèi)绻×耸浅詢筛葸€是注射生物制品。混肴視聽不還是為了賣本廠的東西么，一堆垃圾，忽悠老百姓，讓本來明白的人糊涂，讓本來就糊涂的人徹底喪失判斷力就是你們想要的。號召全體有良心的業(yè)界人士一起來剎住這股歪風(fēng)，還論壇朗朗乾坤，我們要交流的是技術(shù)，不是忽悠。我想說的是，你養(yǎng)過豬么？你見過豬長什么樣么，你知道豬食怎么養(yǎng)的么，豬有幾條腿你都分不清就來對別人挑三揀四了，吆五喝六了。你打開你們公司老總的簡歷，看看他們當(dāng)初在做什么?，F(xiàn)在藥物保健這一套都是你們老總做業(yè)務(wù)員的時候親自告訴養(yǎng)殖戶的，現(xiàn)在好了，有錢了，有地位了，心野黑了，想賺更多的錢了，可同行多，競爭激烈，怎么辦？好辦，我來告訴你們，你們都錯了，就我是對的，我賣的跟你們不一樣，整個中國只有我才最懂養(yǎng)殖，都買我的產(chǎn)品你們才是有良心，才是無公害，才是專業(yè)，你媽怎么會生出你這種畜生，莫非你爹是你媽搞養(yǎng)殖的時候出現(xiàn)的。我真的很想來句國罵，但我怎么能當(dāng)畜生的爹呢，我就看著天雷怎么劈死你們這幫炒作概念的垃圾。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:20
畜牧人論壇是業(yè)界全國最好的論壇，注意，沒有之一。比之灌水論壇的天涯、貓撲的地位。但我極端鄙視一些所謂專業(yè)人，他們天天說用這個藥不好，那個藥不好。又是對人不好，又是危害環(huán)境。但養(yǎng)殖業(yè)是怎么回事你們這些人又不是不清楚，凡是說實(shí)話的你們就說不好，你們到底是什么居心。如同現(xiàn)在非要說妓女下賤，你養(yǎng)個二奶就好了？又是中藥、又是微生態(tài)，一會又鼓搗出來一堆學(xué)術(shù)術(shù)語，生物制劑、提取物。難道這些東西最終起作用的不是化學(xué)品？到底是中藥無毒，還是生物制劑就很安全？你們?nèi)绻×耸浅詢筛葸€是注射生物制品。混肴視聽不還是為了賣本廠的東西么，一堆垃圾，忽悠老百姓，讓本來明白的人糊涂，讓本來就糊涂的人徹底喪失判斷力就是你們想要的。號召全體有良心的業(yè)界人士一起來剎住這股歪風(fēng)，還論壇朗朗乾坤，我們要交流的是技術(shù)，不是忽悠。我想說的是，你養(yǎng)過豬么？你見過豬長什么樣么，你知道豬食怎么養(yǎng)的么，豬有幾條腿你都分不清就來對別人挑三揀四了，吆五喝六了。你打開你們公司老總的簡歷，看看他們當(dāng)初在做什么?，F(xiàn)在藥物保健這一套都是你們老總做業(yè)務(wù)員的時候親自告訴養(yǎng)殖戶的，現(xiàn)在好了，有錢了，有地位了，心野黑了，想賺更多的錢了，可同行多，競爭激烈，怎么辦？好辦，我來告訴你們，你們都錯了，就我是對的，我賣的跟你們不一樣，整個中國只有我才最懂養(yǎng)殖，都買我的產(chǎn)品你們才是有良心，才是無公害，才是專業(yè)，你媽怎么會生出你這種畜生，莫非你爹是你媽搞養(yǎng)殖的時候出現(xiàn)的。我真的很想來句國罵，但我怎么能當(dāng)畜生的爹呢，我就看著天雷怎么劈死你們這幫炒作概念的垃圾。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:21
回復(fù) 40# 葉赫娜蘭.孤城

我怕有人后來修改自己的帖子，先復(fù)制一遍再說。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:29
首先，我不是任何公司的，也沒有任何產(chǎn)品，但既然您在我的帖子下發(fā)表觀點(diǎn)，那我就站在技術(shù)人員的素質(zhì)上，回答一下里面的技術(shù)問題（非技術(shù)問題，如，立場，觀點(diǎn)，恕在下不談了---我回避某些論辯，不參與任何非技術(shù)領(lǐng)域的辯論，所以，早在很久以前，我就是一沒有觀點(diǎn)，二沒有立場的了，但是，技術(shù)人員的錚錚鐵骨，還在?。?，我現(xiàn)總結(jié)一下里面的技術(shù)問題總量，然后撿著會的回答幾個。

1，生物制劑安全不安全。

2，不懂養(yǎng)豬做不做技術(shù)。

對不起，還真找不到?jīng)]其他的了，剩下的都是謾罵了。那就回答這兩項(xiàng)。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:34
1，說生物制劑安全不安全，就好像說衣服在御寒的同時能不能管飽肚子一樣，有點(diǎn)風(fēng)馬牛不及，雖然，服裝從業(yè)者可以通過利潤，買兩包子果腹，但終歸衣服是穿的，不是吃的。

生物制劑，和安全性是兩個概念。

安全的概念是歷史的，相對的，而生物制劑的概念是相對穩(wěn)定和嚴(yán)格的，比如說，嚴(yán)格意義上講，抗生素就是一個相當(dāng)?shù)湫偷纳镏苿?，可是，現(xiàn)在歐盟卻禁用了----可見這是兩個概念。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:40
2，養(yǎng)豬合作技術(shù)，很遺憾，這也是兩個概念。

克隆技術(shù)最早是在我們微生物行業(yè)發(fā)展的，那個時候，畜牧的技術(shù)水平和微生物專業(yè)相比，簡直相差兩個時代，在多利綿羊之后，終于才有克隆技術(shù)和畜牧沾點(diǎn)邊，那在這之前，所有搞分子生物學(xué)的都該放下工作，原地踏步，等著畜牧行業(yè)趕上來才做科研不成？那可是一等就是幾十年?。〔粌H僅是中國人，就是咱人類，等不起。

往國內(nèi)說，我在抗生素研究機(jī)構(gòu)引進(jìn)國外的獸用抗生素時，不僅僅我自己，就是整個機(jī)構(gòu)幾萬號人，沒有一個懂得養(yǎng)豬，而這藥物，偏偏就是給豬用的，治療支原體的-----這樣，我們就放下國家的工作，先學(xué)學(xué)養(yǎng)豬去？

我認(rèn)為這兒，概念雜糅了。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-15 09:45
我發(fā)表這個帖子，原帖子，本來是給四川抗生素研究所的一個內(nèi)部交流的綜述，拿到論壇，是為了幫助畜牧業(yè)弟兄們正本清源，分清是非，不要壞人蠱惑。

如果畜牧行業(yè)不接受，我改，以后，再也不把其他行業(yè)（主要是我們行業(yè)）的東西介紹進(jìn)來了----我省事----就是一部分人在夜郎自大中封閉，目光短淺，而不能發(fā)展，又和我有什么關(guān)系？

[ts]葉赫娜蘭.孤城于 2010-3-15 09:46 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

想起一個呂洞賓和某種哺乳動物的故事。

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-3-18 14:34
好久沒有關(guān)注這個版塊了。

回答了兩個技術(shù)問題，也沒人搭理，今天才看看板塊----明白了，原來是刷帖啊，并不是認(rèn)真的回復(fù)，就是把所有的帖子回復(fù)相同的內(nèi)容，然后，在自己還沒有乏味之前，盡可能的多拷貝幾個帖子。

唉！刷帖！

居然出自一個自認(rèn)為瞧不起灌水論壇如天涯貓撲之類的人之手！

這世界，居然墮落到這種地步，我想這不是個人的悲哀，而是民族的悲哀！

一屋不掃，何以掃天下！

振興中華！從點(diǎn)點(diǎn)滴滴做起，從在小事上認(rèn)真開始！呼吁嚴(yán)肅的人生態(tài)度！

[ts]葉赫娜蘭.孤城于 2010-3-18 14:35 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

早知道是刷帖，我就不該回答！

[ts]葉赫娜蘭.孤城于 2010-3-18 14:35 補(bǔ)充以下內(nèi)容[/ts]

很后悔?。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。?！

作者: wjianyang123 時間: 2010-4-11 23:17
講的很專業(yè)，好好學(xué)習(xí)了。

作者: rq165531343 時間: 2010-4-13 09:09
個人覺得，如果你的產(chǎn)品是出口？你會不會考慮做相關(guān)檢測嗎？抗生素殘留的的確確是對人有危害，只是你一時不會留意，如果抗生素藥物泛濫，那以后怎么辦？
不要貪圖一時的省事，為他人增添危害。請?jiān)旄Ｋ藒~~

作者: sdlaosui 時間: 2010-4-20 21:16
只有學(xué)習(xí)的份了，不說話不代表不崇拜，只是沒法表達(dá)而已

作者: ywg1021shan 時間: 2010-5-10 15:42
學(xué)習(xí)了，講的很深刻

作者: kkl301 時間: 2010-7-12 07:24
學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)。。。

作者: wuhandiyi 時間: 2010-8-26 17:34
怎么做啦？

作者: 基層配方師 時間: 2010-8-27 13:02
1. 您請講的真好，學(xué)到了東西，謝謝！希望以后在專業(yè)雜志發(fā)表文章，而不是發(fā)帖。至于有人不禮貌回帖，您多包涵，我們飼料養(yǎng)殖業(yè)你從極端回帖看得出素質(zhì)還較低；另外，角度立場也不一樣，賣獸藥的當(dāng)然希望抗生素再用一萬年，他們不了解我們配方師的難處。

2. 可否請教您兩個問題：a）你提取出的最后酶產(chǎn)品耐受高溫嗎？；b）可否告訴酶測定方法？急！

3. 另外，您有空參閱“現(xiàn)實(shí)與傳說中的后抗生素時代之一二三”的帖子，他期待你說幾句。

4. 真誠感謝！多發(fā)好帖！技術(shù)為主，不做垃圾辯論！謝謝！

作者: levekingph 時間: 2010-8-27 13:29
學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)?。。。。。。。。。。。。。。?！

作者: 葉赫娜蘭.孤城 時間: 2010-8-27 13:49
回復(fù) 53# 基層配方師

1，酶一般的講，不耐高溫，如果固定化之后，如“包被”等處理，可以耐受一定程度的高溫，但是，即便包被，目前看依然是不穩(wěn)定。

另外，某些酶本身相對來說，由于結(jié)構(gòu)或來源，可能耐受一定程度的高溫，但依然看做高溫下不穩(wěn)定。

我們表達(dá)的酶，因?yàn)槲覀儧]有期待它耐高溫，所以，實(shí)話實(shí)說，我不知道耐不耐高溫----一般來估計(jì)，不耐高溫。

2，酶的測定方法，

A，以底物為方法，設(shè)置空白測酶活，這個可以查到的。一般用于產(chǎn)物的最終測定。在表達(dá)過程中，由于酶有可能是先得到包涵體，折疊錯誤，沒有活性，所以不用這個方法實(shí)現(xiàn)過程檢測。

B，用電泳，根據(jù)分子量定性的檢測----這個是實(shí)驗(yàn)室常規(guī)做法。

C，可能的更先進(jìn)方法----對不起，這個可以有，這個真沒有---沒辦法，我們也就用上面兩種方法了，抱歉。

作者: 基層配方師 時間: 2010-8-27 17:36
回復(fù) 55# 葉赫娜蘭.孤城

回復(fù)很清楚，非常感謝！

作者: as1985323123 時間: 2010-10-31 23:48
學(xué)習(xí)學(xué)習(xí)

歡迎光臨畜牧人 (http://m.livemosquitofree.com/)